胞内劳森菌亚单位疫苗佐剂的筛选与候选抗原的免疫原性分析

摘要

为了筛选胞内劳森菌亚单位疫苗的合适佐剂并评估疫苗的免疫原性，以实验室分离的胞内劳森菌基因组DNA为模板，特异性扩增了针对重组鞭毛蛋白(r Fli C)、碳端截短的神经氨酸酶蛋白(t NA-C)和重组寡肽结合蛋白A(r OppA) 3个重组蛋白的目的基因并进行了原核表达。将r Fli C分别与Gel 02、ISA 201、ISA 15A和Carbopol 971P佐剂乳化后以150μg/只的剂量免疫小鼠，通过抗体水平、淋巴细胞增殖试验和细胞因子水平检测筛选最佳免疫效果的佐剂;将3个重组蛋白与最佳佐剂乳化，以每种抗原50μg/只的剂量混合免疫仔猪，通过检测抗体水平和细胞因子水平，评估其对猪体的免疫原性。结果:r Fli C与不同佐剂乳化二免小鼠后血清抗体水平均显著升高(P<0.01)，且在第18周时仍维持在较高水平，用r Fli C刺激各免疫组小鼠的淋巴细胞后均出现了细胞增殖，ISA 15A组的淋巴细胞活力是对照组的3.4倍，且显著高于其他免疫组(P<0.05)。3个重组蛋白混合后经ISA 15A乳化后免疫仔猪，间接ELISA检测针对3个重组蛋白抗体效价达1∶102 400以上，干扰素-γ(IFN-γ)和白细胞介素(IL)-4水平上升极显著(P<0.000 1),IL-12水平虽有上升但不显著。本研究为后续胞内劳森菌亚单位疫苗的开发筛选了合适的佐剂，并提供了优势的候选抗原。

关键词

胞内劳森菌 / 原核表达 / 佐剂 / 亚单位疫苗 / 免疫原性