基于MICU2探讨红花清肝十三味丸对急性肝损伤的保护作用

摘要

探讨红花清肝十三味丸（HHQG）对四氯化碳诱导急性肝损伤小鼠的保护效应及其分子机制，特别关注线粒体钙离子摄取蛋白2（Mitochondrial calcium uniporter 2,MICU2）与氧化应激的关联。通过HE/Masson组织学、血清学、肝组织氧化应激生化指标评估病理变化，基于不同时相（12～120 h）开展RNA-seq时序分析并以qPCR验证关键基因；采用蛋白质组学鉴定差异表达蛋白并进行功能富集与免疫组织化学时相验证；通过Pearson相关分析探讨MICU2与SOD/MDA关系；采用AutoDock Vina对HHQG关键活性成分（Apigenin、Emodin、Genistein、Kaempferol、Quercetin）与MICU2进行分子对接预测结合位点。结果表明，在12～72 h CCl₄能够诱导明显的肝小叶结构破坏、炎症浸润及早期胶原沉积。此外，血清丙氨酸氨基转移酶（Alanine aminotransferse,ALT）和天冬氨酸氨基转移酶（Aspartate aminotransferase,AST）在12～72 h达高峰；HHQG可在早期显著减轻组织病理损伤、抑制炎症与胶原沉积，并使ALT、AST、超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase,SOD）、丙二醛（Malondialdehyde,MDA）等指标部分或完全恢复。qPCR与蛋白免疫组化提示，MICU2在中期（48～72 h）显著上调，HHQG能抑制其异常上调。Pearson相关分析显示，在模型组各时间点，MICU2与SOD活性呈显著负相关（P<0.05），而与MDA含量呈显著正相关（P<0.05）。经HHQG干预后，随着MICU2表达被有效抑制，MICU2与SOD、MDA之间的相关性发生逆转，在各时间点MICU2与SOD呈正相关，与MDA呈负相关。蛋白组学结果也显示，HHQG对解毒、蛋白清除与抗氧化相关通路的调控。分子对接预测表明MICU2存在两个可结合口袋，5种活性成分均可与之结合（Apigenin得分最优），提示可能的直接作用位点。HHQG通过抑制炎症与胶原沉积、增强抗氧化能力并调控MICU2相关的线粒体钙稳态，从分子与功能层面缓解CCl₄诱导的急性肝损伤。MICU2及其与HHQG活性成分的相互作用可能为其抗氧化防护作用的重要机制与潜在靶点。

关键词

红花清肝十三味丸 / MICU2 / 氧化应激 / 急性肝损伤