莱茵衣藻TCF20的表达分析与多克隆抗体的制备

摘要

在哺乳动物中，TCF20作为转录因子参与细胞增殖和凋亡、免疫以及代谢等生理过程。近些年，还发现TCF20缺陷会导致神经祖细胞增殖和分化的异常，人或者小鼠TCF20缺陷表现为自闭症样神经发育障碍疾病，并且TCF20也成为相关疾病的基因筛查靶标。莱茵衣藻TCF20相关研究此前未见报道，且尚未有从纤毛调控的角度研究TCF20的功能和分子机制。为了深入探究模式藻莱茵衣藻TCF20对纤毛的作用，对其蛋白进行了同源性分析。利用莱茵衣藻TCF20的cDNA序列构建莱茵衣藻内源TCF20蛋白原核表达载体质粒pGEX-6p-1-TCF20-GST，并转入到大肠杆菌BL21(DE3)诱导表达，得到55 kd的含有GST标签的TCF20-GST的重组融合蛋白。将亲和纯化的重组蛋白免疫小鼠，采集第五次免疫后的血清，以间接ELISA法测定抗血清效价达到1∶512 000，利用蛋白免疫印迹检测制备的抗体，该抗体可以特异性识别莱茵衣藻内源TCF20蛋白，且CrTCF20主要定位在细胞质，细胞核有较弱定位。鞭毛再生过程中，TCF20需从细胞质进入细胞核以发挥功能。结果表明，该实验成功制备CrTCF20蛋白多克隆抗体，为后续莱茵衣藻中TCF20的功能和机制的研究奠定了基础。

关键词

TCF20 / 莱茵衣藻 / 转录因子 / 纤毛调控 / 原核表达 / 多克隆抗体