SCF泛素连接酶的体外泛素化体系构建与检测

胡健健; 梅文聪; 张文慧; 刘主

doi:10.13300/j.cnki.hnlkxb.2024.02.030

华中农业大学学报 ›› 2024, Vol. 43 ›› Issue (02) : 273 -279. DOI: 10.13300/j.cnki.hnlkxb.2024.02.030

SCF泛素连接酶的体外泛素化体系构建与检测

胡健健, 梅文聪, 张文慧, 刘主

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摘要

为研究蛋白质的体外泛素化过程，利用大肠杆菌表达系统异源表达和纯化APPBP1/UBA3(E1)、UBC12(E2)、Cullin1-Rbx1(E3)和Nedd8(neural precursor cell expressed developmentally down-regulated protein 8)蛋白，制备FITC-Cysteine绿色荧光素标记的泛素Ub(Ubiquitin)，构建了SCF泛素连接酶的体外泛素化体系，同时实现快速检测SCF泛素连接酶中Cullin1蛋白的自泛素化修饰。结果表明，建立的体外SCF E3自泛素化活性反应体系具有较高的可操作性和便利性。