莱茵衣藻LRR-1蛋白多克隆抗体的制备与鉴定

摘要

为深入研究富含亮氨酸重复序列（leucine-rich repeat,LRR）在机体先天免疫过程中的作用机制，以莱茵衣藻（Chlamydomonas reinhardtii）为模式生物，通过生物信息学预测分析CrLRR-1蛋白的二级结构、亲水性及免疫原性等理化性质，人工设计并合成特异性肽段，与钥孔血蓝蛋白（keyhole limpet hemocyanin,KLH）偶联后免疫新西兰白兔。结果显示：采用间接ELISA法测定抗血清效价达到1∶512 000，将抗血清依次经Protein A和抗原亲和纯化后得到CrLRR-1蛋白多克隆抗体；利用免疫印迹与免疫荧光检测制备的抗体，该抗体可特异性识别莱茵衣藻内源LRR-1蛋白，且CrLRR-1蛋白主要定位于细胞膜。结果表明，成功制备CrLRR-1蛋白多克隆抗体。

关键词

莱茵衣藻 / 富亮氨酸重复序列 / 先天免疫 / 防御反应 / 多克隆抗体