香蕉线条病毒多重免疫捕获PCR方法的建立及应用

摘要

为提高复合感染香蕉的香蕉线条病毒（banana streak virus,BSV）的诊断效率，保障香蕉产业的健康发展，设计基于香蕉线条病毒OL(banana streak OL virus,BSOLV)、香蕉线条病毒GF(banana streak GF virus,BSGFV)的外壳蛋白（coat protein,CP）基因和香蕉线条病毒IM(banana streak IM virus,BSIMV)的RNase H基因保守序列的特异引物，利用BSV多克隆抗血清捕获病毒为模板，通过对引物浓度、退火温度等条件的优化，建立能够同步检测BSOLV、BSGFV、BSIMV的多重免疫捕获PCR方法。研究结果显示，建成的最优体系为BSOLV、BSGFV、BSIMV上下游引物终浓度（μmol/L）比例0.5∶0.5∶0.5，退火温度为63℃。利用该多重免疫捕获PCR方法可以从1 mg/mL的香蕉粗提液中分别检测出BSOLV、BSGFV和BSIMV。所建立的多重免疫捕获PCR方法与引起相似症状的黄瓜花叶病毒（cucumber mosaic virus, CMV）无交叉反应。对15份田间香蕉样品进行检测，能够明显区分出复合侵染的样品，经测序验证，BSOLV、BSGFV和BSIMV的扩增产物与GenBank相应病毒同源率分别在94%以上。表明该多重免疫捕获PCR方法具有较高的敏感性和特异性，可应用于香蕉种苗以及田间香蕉样品中3种BSV的检测。

关键词

香蕉 / 香蕉线条病毒 / 多重免疫捕获PCR / 复合感染