免疫增强剂CVC1302调控体细胞高频突变的机制研究

摘要

为探究CVC1302调控生发中心B细胞发生体细胞高频突变的免疫机制，本研究将4-羟基-3-硝基苯乙酰基耦联鸡卵白蛋白（NP-OVA）混合免疫增强剂CVC1302后，利用ISA206乳化获得疫苗。BALB/c小鼠分为2组，分别后腿肌肉注射NP-ISA206和NP-CVC1302-ISA206，每只50μg NP-OVA，免疫后14 d，利用流式分选获得生发中心B细胞，利用巢氏PCR扩增B细胞免疫球蛋白序列可变区VH_186.2,Western blot检测诱导活化的胞苷脱氨酶（AID）、Pax5表达水平，β-actin作为内参，比较组间AID、Pax5表达差异；利用荧光定量PCR检测AID、Pax5基因转录水平。试验结果显示：CVC1302显著诱导生发中心B细胞免疫球蛋白序列VH186.2突变频率，试验组W33L突变频率为62.2%，而对照组仅为20.25%;CVC1302可提升AID蛋白、Pax5蛋白表达水平，其中试验组AID蛋白相对表达水平为0.72，对照组仅为0.16，试验组Pax5蛋白相对表达水平为0.62，对照组仅为0.26;CVC1302增强AID基因、Pax5基因转录水平，相较于对照组分别提高2.36、4.13倍。推断CVC1302依赖Pax5介导AID表达，调控生发中心B细胞发生体细胞高频突变。

关键词

免疫增强剂CVC1302 / 体细胞高频突变 / 免疫机制 / 生发中心B细胞 / 胞苷脱氨酶 / Pax5