α-淀粉酶产生菌的筛选鉴定及Ba8a蛋白的酶学特性

摘要

为解决农作物秸秆降解的问题，采用选择性培养基从牛胃秸秆发酵物中筛选获得1株高产α-淀粉酶的菌株，命名为SCUEC8菌株。通过对SCUEC8菌株进行形态学观察和生理生化特性分析，根据16S rDNA序列构建系统进化树，鉴定该菌为枯草芽孢杆菌。以SCUEC8菌株的总DNA为模板扩增α-淀粉酶基因ba8a，构建pET28a（+）-ba8a重组质粒，转化大肠杆菌BL21菌株进行异源表达，进一步研究Ba8a蛋白酶学特性。结果显示，ba8a基因大小为1 434 bp,Ba8a蛋白分子质量为52.9 ku；在pH 5.0、反应温度45℃条件下，Ba8a蛋白相对酶活性较高；Mn²⁺对Ba8a蛋白酶活性具有较高促进作用，Cu²⁺对Ba8a蛋白酶活性具有较高抑制作用；在pH6.0、反应温度0℃条件下，Ba8a蛋白较稳定。结果表明，枯草芽孢杆菌SCUEC8菌株具有α-淀粉酶活性，有助于提高农作物秸秆的降解率。

关键词

α-淀粉酶 / 枯草芽孢杆菌SCUEC8菌株 / ba8a基因 / 酶学特性

基金资助

中国烟草总公司“雪茄烟叶开发与应用重大专项”揭榜棒挂帅项目(中烟办2022[111]号,110202201039(XJ-10)); 国家自然科学基金项目(31070087,32372809); 湖北省大学生创新创业训练计划项目(SCX2024066)