基于CRISPR/Cas9系统构建NCOA4敲除的MARC-145细胞系及其对HP-PRRSV复制的影响

摘要

为探究NCOA4介导的铁自噬在PRRSV感染中的作用，利用CRISPR/Cas9技术在PRRSV易感的MARC-145细胞中敲除铁自噬的关键受体NCOA4基因，并结合Sanger测序和Western blot检测NCOA4的敲除效率。同时运用流式细胞术、qPCR、Western blot、TCID₅₀等对NCOA4缺失型和野生型MARC-145进行细胞周期、细胞活性检测，以及检测NCOA4缺失对PRRSV复制的影响。结果显示，本研究成功构建NCOA4基因敲除的MARC-145细胞系。此外，相比于野生型MARC-145细胞系，敲除NCOA4显著增加PRRSV ORF7mRNA、N蛋白及病毒滴度水平，同时促进FTH 1蛋白表达。结果表明，铁自噬的关键受体基因NCOA4缺失能促进PRRSV复制。

关键词

CRISPR/Cas9 / NCOA4 / 铁自噬 / 猪繁殖与呼吸综合征 / 基因敲除 / 细胞活性