香蕉细菌性鞘腐病菌实时荧光定量PCR检测方法的建立

摘要

为实现香蕉细菌性鞘腐病的早期准确检测，基于香蕉细菌性鞘腐病菌的管家基因fusA设计特异性引物，优化扩增条件，建立了SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法，并与常规PCR进行比较。结果显示，SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测质粒DNA的灵敏度为3.3×10^-5 ng/μL，是常规PCR的100倍。利用建立的方法对接种香蕉细菌性鞘腐病菌XJ5-1的香蕉叶鞘和土样进行检测，结果发现该方法能检测到香蕉叶鞘中拷贝数为4.31×10～3 copies/μL和土样中拷贝数为1.07×10～9 copies/μL的XJ5-1；能检测出接种浓度为1×10～3CFU/mL的温室土样中的XJ5-1，灵敏度是常规PCR的100倍。结果表明，建立的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR法快速简便、灵敏度高，可实现香蕉细菌性鞘腐病的早期诊断。

关键词

香蕉细菌性鞘腐病 / Dickeya dadantii / SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR