基于网络药理学和细胞实验探讨清解扶正颗粒逆转大肠癌耐药的作用机制

摘要

目的 通过网络药理学、分子对接技术并结合细胞实验，探讨清解扶正颗粒（QFG）逆转结直肠癌（CRC）耐药的活性成分、潜在靶点及作用机制。方法 体外实验验证人大肠癌HCT-8/ANRIL细胞多药耐药性以及QFG对HCT-8/ANRIL细胞耐药性的逆转作用。依托TCMSP数据库筛选QFG的有效活性成分，利用PubChem、SwissTargetPrediction数据库预测对应靶点，通过GeneCards、OMIM、PharmGKB数据库收集与CRC耐药相关的疾病靶点，取两者交集。通过Cytoscape 3.9.1软件构建中药-活性成分-靶点网络，STRING数据库构建蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）网络并筛选核心靶点；DAVID平台对交集靶点进行基因本体论（GO）功能和京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析；使用AutoDock Vina软件对QFG主要活性成分和关键靶点进行分子对接。进一步通过qPCR检测预测核心靶点的mRNA相对表达水平；Western blot检测预测关键通路相关蛋白表达量。结果 实验结果显示，HCT-8/ANRIL细胞具有多药耐药性，QFG对其耐药性具有逆转作用。网络药理学分析显示，QFG活性成分对应靶点465个，CRC耐药靶点1 802个，QFG与CRC耐药交集靶点175个；筛选出QFG的主要活性成分黄芩素、高车前素、木犀草素等；QFG逆转CRC耐药的可能关键靶点为Akt1、IL-6和EGFR等，信号通路涉及PI3K/Akt、Ras、MAPK、EGFR等；分子对接显示，QFG主要活性成分与关键靶点对接活性良好。体外实验结果表明QFG可明显下调HCT-8/ANRIL细胞中IL-6和EGFR的mRNA表达及p-PI3K、p-Akt蛋白的表达（P<0.05）。结论 QFG逆转结直肠癌耐药的物质基础主要为黄芩素、高车前素、木犀草素等，IL-6、EGFR及PI3K/Akt信号通路是其关键作用靶点和重要途径。

关键词

结直肠癌 / 耐药 / 清解扶正颗粒 / 网络药理学 / PI3K/Akt信号通路

基金资助

国家自然科学基金项目（81774121）; 福建省自然科学基金项目（2022J01368,2021J01939）; 陈可冀中西医结合发展基金项目（CKJ2022004）