康达心颗粒制备工艺优化及质量控制

摘要

目的 优化康达心颗粒的提取工艺及成型工艺，并建立含量测定方法。 方法 采用L9（3⁴）正交实验法对康达心颗粒提取工艺和成型工艺的影响因素进行考察，优化其工艺；建立HPLC法测定芍药苷和丹酚酸B含量。 结果 康达心处方的最佳水提工艺：加6倍量的水，浸泡0.5 h，提取2次，每次1.5 h；颗粒剂最佳成型工艺为稠膏∶糊精∶可溶性淀粉＝1∶1∶1，以水为黏合剂，80%乙醇溶液为润湿剂，乙醇∶稠膏＝1 mL∶1 g；芍药苷在3.026～96.80 µg/mL浓度范围内呈良好的线性关系，平均回收率为98.60%，RSD为1.91%；丹酚酸B在2.36～75.40 µg/mL浓度范围内呈良好的线性关系，平均回收率为99.09%，RSD为1.89%。 结论 康达心颗粒制备工艺稳定、可行，建立的含量测定方法具有较好准确性和专属性，可用于康达心颗粒的质量控制。

Graphical abstract

关键词

康达心颗粒 / 提取工艺 / 成型工艺 / 正交试验 / 质量标准

康达心制剂是福建中医药大学附属人民医院熊尚全教授长期临床实践后自创的方药，原剂型为院内制剂康达心口服液（批准文号：闽药制字Z06106059），方中含有丹参、黑附子、白芍、白术、黄芪、当归、茯苓、党参、泽泻和葶苈子共10味中药。临床实践中，康达心口服液可用于治疗各种原因所致的慢性心力衰竭疾病^［1-2］，具有疗效好、毒副作用少等优点。但口服液制剂存在体积大、携带不便、液体制剂易腐败等缺点。笔者以中医药理论为基础，结合现代药物制剂和分析技术，以干膏得率、丹酚酸B含量为评价指标，采用L9（3⁴）正交实验法筛选康达心颗粒的最优提取工艺；以颗粒的成型率、丹酚酸B含量、休止角的综合得分为评价指标，采用L9（3⁴）正交实验法筛选康达心颗粒的最佳成型工艺；并采用HPLC法分析其芍药苷和丹酚酸B含量，控制康达心颗粒的质量，确保制剂的质量和临床应用。

1 材　料

1.1 实验仪器

高效液相色谱仪（型号：HP1100），紫外检测器（型号：G1328A）均购自美国安捷伦公司；低速离心机（安徽中科中佳科学仪器有限公司，型号：SC-3610）；电热鼓风干燥箱（上海博讯医疗生物仪器股份有限公司，型号：BGZ-420）；超声机（昆山市超声仪器有限公司，型号：KQ-500DE）；电子分析天平（梅特勒-托利多仪器上海有限公司，型号：ME204E，规格：220 g/0.1 mg）；恒温水浴锅（江苏金坛市江南仪器制造厂，型号：HH-2）。

1.2 试剂与药物

丹酚酸B对照品（北京中科质检生物技术有限公司，批号：180208，纯度≥98%）；芍药苷对照品（成都普思生物科技股份有限公司，批号：PS000826，纯度≥98%）；糊精（北京索莱宝科技有限公司，批号：20231110）；可溶性淀粉（北京索莱宝科技有限公司，批号：2230802002）。处方中所用药材丹参、白芍、黑顺片、茯苓、白术、泽泻、党参、黄芪、当归、葶苈子均购自厦门燕来福制药有限公司，经福建中医药大学附属人民医院林雄主任中药师鉴定均为正品。康达心颗粒由福建中医药大学附属人民医院制剂室自制（批号：20231101、20231102、20231103）；乙腈、甲醇均为色谱纯，其他试剂均为分析纯；水为超纯水。

2 方　法

2.1 丹酚酸B的含量测定

2.1.1 色谱条件

色谱柱：Ultimate XB-C₁₈柱（250 mm×4.6 mm，5 µm）；流动相：乙腈-0.1%磷酸水（25∶75）；流速：1.0 mL/min；检测波长：230 nm；进样量：10 μL；柱温：室温。

2.1.2 对照品溶液制备

精密称取丹酚酸B对照品6.0 mg置于100 mL棕色量瓶中，加20%甲醇溶液溶解定容，配制成60 µg/mL丹酚酸B对照品溶液。

2.1.3 供试品溶液制备

精密称取样品稠膏约1 g，置于具塞锥形瓶中，加入适量20%甲醇溶液，称定重量，超声（功率300 W，频率40 kHz）提取30 min，冷却至室温，用20%甲醇溶液补足损失的重量，离心10 min，取上清液，即得供试品溶液。

2.1.4 含量测定

精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10 μL，分别注入高效液相色谱仪，测得丹酚酸B的峰面积，并计算其含量。

2.2 康达心颗粒的提取工艺研究

2.2.1 提取工艺因素水平表

本实验选取药材的浸泡时间（A）、加水量（B）、提取时间（C）、提取次数（D）作为考察因素，以丹酚酸B含量（每次提取液浓缩到100 mL稠膏）、干膏收率（提取稠膏×密度/生药量×100%）作为评价指标，通过L9（3⁴）正交实验设计，进行康达心颗粒最佳水提工艺的筛选。见表1。

2.2.2 工艺验证试验

按照康达心处方，称取3份，每份各1 900 g，根据实验得到的最佳提取工艺实验，浓缩到100 mL稠膏，测定稠膏密度，计算干膏收率，取适量干膏按“2.1.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.1.1”项下色谱条件测定，计算丹酚酸B含量，验证最佳提取工艺实验。

2.3 L9（3⁴）正交实验法优选康达心颗粒的最佳成型工艺

2.3.1 稠膏的制备

按康达心处方称取中药饮片，每份各1 900 g；根据实验得到的最佳提取工艺，加入药材量6倍的清水，浸泡0.5 h；采用煎煮法提取，提取2次，每次提取1.5 h，过滤，合并滤液，滤液减压浓缩至密度为1.29 g/mL的稠膏。

2.3.2 辅料的选择

糊精具有提高药物溶出度、黏性较低、稳定性好、流动性强等优点^［3］；可溶性淀粉作为稀释剂，且不与方中药物发生化学反应，具有稀释和粘合等作用。二者吸湿性均较小，可改善中药颗粒剂吸湿性较强的问题^［4］。康达心浸膏黏性大，吸湿性强，适合添加糊精和淀粉作为赋形剂。

2.3.3 颗粒剂的制备

将稠膏与可溶性淀粉和糊精按比例混合均匀，用相应浓度的乙醇作润湿剂，水作黏合剂，湿法制粒，制成“握之成团，轻压即散”的软材，以20目筛进行制粒，干燥，整粒，即得颗粒剂。

2.3.4 评价指标

2.3.4.1 成型率

根据2020年版《中华人民共和国药典：四部》（通则0982）测定，以能通过1号筛（10目）而未通过5号筛（80目）的颗粒为合格颗粒，称重，计算成型率。

成型率＝（合格颗粒重量/总颗粒重量）×100%

2.3.4.2 丹酚酸B含量的测定

精密称取样品颗粒1 g，按“2.1.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.1.1”项下色谱条件测定，并计算丹酚酸B含量。

2.3.4.3 休止角的测定

参考文献［5］，采用固定漏斗法。取3个大小一样的漏斗串联固定于铁架台上，铁架台下放置一张测量纸，让最下方漏斗的底部边缘距测量纸1 cm（高度H）；取适量颗粒置于漏斗中，敲击漏斗，使颗粒匀速下落，直至下落的药物颗粒形成的圆锥体顶点到达最下方漏斗的底部边缘为止，测量圆锥体直径（R），计算休止角α。重复3次，取平均值。

α＝arctan 2H/R

2.3.4.4 综合得分

成型率对颗粒剂的外形影响较大，丹酚酸B含量和休止角对于颗粒剂的成型影响变化较少。因此规定评价指标权重系数成型率为0.4，丹酚酸B含量为0.3，休止角为0.3，计算综合得分。

综合得分（%）＝成型率/最大成型率×0.4＋丹酚酸B含量/丹酚酸B最大含量×0.3＋最小休止角/休止角×0.3

2.4 康达心颗粒成型工艺的研究

2.4.1 成型工艺因素水平表

为研究康达心颗粒成型工艺，选取稠膏、可溶性淀粉与糊精比例（A）、乙醇浓度（B）、乙醇与稠膏比例（C）为3个因素，以颗粒成型率、丹酚酸B含量、休止角的综合得分为评价指标，通过L9（3⁴）正交实验设计，优选康达心颗粒的最佳成型工艺。因素水平见表2。

2.4.2 验证成型工艺

按照上述的最优成型工艺制备3批康达心颗粒，按“2.3.4”项下方法，以颗粒的成型率、丹酚酸B含量、休止角的综合得分作为评价指标验证最佳成型工艺。

2.5 康达心颗粒芍药苷、丹酚酸B含量测定

2.5.1 色谱条件

色谱柱：Ultimate XB-C₁₈反相色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 µm）；流动相：乙腈-0.1%磷酸水（25∶75）；流速：1.0 mL/min；波长：230 nm；进样量：10 μL。

2.5.2 对照品溶液的制备

分别精密称取芍药苷对照品9.68 mg、丹酚酸B对照品7.54 mg，置于100 mL棕色量瓶中，加20%甲醇溶液溶解并定容，即得混合对照品溶液（芍药苷浓度为96.80 μg/mL，丹酚酸B浓度为75.40 μg/mL）。

2.5.3 供试品溶液的制备

取康达心颗粒1 g，精密称定，置于锥形瓶中，精密加入10 mL 20%甲醇溶液，称重，超声提取（功率300 W，频率40 kHz）0.5 h，放冷，用20%甲醇溶液补足减失的质量，置离心管中，离心10 min，取上清液，即得供试品溶液。

2.5.4 阴性对照溶液的制备

按“2.3.1”“2.3.2”“2.3.3”项下方法，分别制备缺白芍和缺丹参的康达心阴性对照样品，按“2.5.3”项下方法，制备相应的阴性对照溶液。

2.5.5 专属性考察

取阴性对照溶液、混合对照品溶液和康达心颗粒供试品溶液按设定的色谱条件分别进样测定，色谱图见图1，可见在此色谱条件下，阴性对照对测定无干扰。

2.5.6 线性关系考察

取配制好的芍药苷和丹酚酸B混合对照品溶液，用20%甲醇配制系列浓度的混合对照品溶液：芍药苷为3.025、6.05、12.10、24.20、48.4、96.80 µg/mL，丹酚酸B为2.36、4.71、9.42、18.85、37.70、75.40 µg/mL，按“2.5.1”项下色谱条件测定，以浓度（C）为横坐标，峰面积（A）为纵坐标，得线性回归方程和线性关系。

2.5.7 精密度试验

取混合对照品溶液，根据“2.5.1”项下色谱条件，进样10 µL，连续测定6次，计算芍药苷、丹酚酸B的RSD值。

2.5.8 重复性试验

取康达心颗粒（批号：20231101），按“2.5.3”项下方法制备供试品溶液6份，根据“2.5.1”项下色谱条件测定，计算芍药苷、丹酚酸B含量的RSD值。

2.5.9 稳定性考察

取康达心颗粒（批号：20231101）按“2.5.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.5.1”项下色谱条件，在0、1、2、4、6、8 h时分别进样测定，计算芍药苷、丹酚酸B含量的RSD值。

2.5.10 加样回收率试验

取康达心颗粒样品（批号：20231101，芍药苷和丹酚酸B含量分别为1.200 1、1.025 2 mg/g）6份，精密称取约0.5 g，置于锥形瓶中，按1∶1的比例分别精密加入芍药苷对照品0.594 1 mg，丹酚酸B对照品为0.508 7 mg，按“2.5.3”项下方法制备得供试品溶液，根据“2.5.1”项下色谱条件测定，计算芍药苷、丹酚酸B回收率和RSD值。

2.5.11 含量测定

取批号为20231101、20231102、20231103的康达心颗粒，按“2.5.3”项下方法制备供试品溶液，根据“2.5.1”项下色谱条件测定，计算康达心颗粒中芍药苷、丹酚酸B的含量及RSD值。

3 结　果

3.1 康达心颗粒最佳提取工艺结果

用L9（3⁴）正交实验法优选康达心颗粒最佳提取工艺结果，按照因素水平表的正交试验，结果提取工艺中各因素影响的程度依次为：D＞C＞A＞B，即影响最大为提取次数，次之为提取时间，其次是浸泡时间，影响最小为加水量。由综合得分排列可得D₁C₁A₂B₂，即加6倍量的水，浸泡0.5 h，提取2次，每次提取时间为1.5 h。结果见表3、表4。

3.2 提取工艺验证试验结果

按康达心处方称取3份药材，由上述的最佳提取工艺D₁C₁A₂B₂提取，测定3份的干膏收率、丹酚酸B含量（稠膏），结果见表5、表6。

3.3 康达心颗粒的最佳成型工艺结果

由康达心颗粒的最佳成型工艺与结果表中R值排序可知，成型工艺各因素影响程度依次为：B＞C＞A，即影响最大的为乙醇浓度，次之为乙醇用量，稠膏与糊精的比例影响最小。由综合得分排序可得B₁C₂A₁，即乙醇浓度为80%，乙醇∶稠膏＝1 mL∶1 g，稠膏∶可溶性淀粉∶糊精的比例为1∶1∶1。结果见表7和表8。

3.4 验证最佳成型工艺实验结果

按最优成型工艺制备3批颗粒剂，照“2.3.3”项下方法测定，结果：3批颗粒成型率、休止角及丹酚酸B含量无明显差异，优选的最佳成型工艺稳定。见表9、表10。

根据康达心颗粒提取工艺和成型工艺的L9（3⁴）正交实验考察结果，得到康达心处方的最佳水提工艺：加入药材量6倍的水量，浸泡0.5 h，提取2次，每次1.5 h；颗粒剂最佳成型工艺为稠膏∶糊精∶可溶性淀粉＝1∶1∶1，以水为黏合剂，80%乙醇溶液为润湿剂，乙醇∶稠膏＝1 mL∶1 g。

3.5 方法学考察实验结果

以对照品浓度（X）为横坐标，峰面积（Y）为纵坐标，得芍药苷回归方程Y＝48.214X＋26.320（r＝0.999 8），表明芍药苷在3.026～96.80 µg/mL浓度范围内呈良好的线性关系；丹酚酸B回归方程Y＝18.367X＋54.218（r＝0.999 9），表明丹酚酸B在2.36～75.40 µg/mL浓度范围内呈良好的线性关系。

3.5.1 精密度试验结果

计算芍药苷、丹酚酸B精密度RSD值分别为1.22%、1.86%，表明该色谱仪器精密度良好。

3.5.2 重复性试验结果

计算得到芍药苷、丹酚酸B重复性RSD值分别为1.65%、1.74%，结果显示该实验方法重复性较好。

3.5.3 稳定性考察结果

计算得到芍药苷、丹酚酸稳定性B含量RSD值分别为2.04%、2.36%，表明供试品溶液在8 h内稳定。

3.5.4 回收率试验结果

测得芍药苷的平均回收率为98.60%，RSD为1.91%；丹酚酸B的平均回收率为99.09%，RSD为1.89%。结果见表11。

3.6 不同批次中芍药苷、丹酚酸B含量测定结果

分别取批号为20231101、20231102、20231103的康达心颗粒，按“2.5.3”项下方法处理，根据“2.5.1”项下色谱条件测定，计算芍药苷、丹酚酸B含量及RSD值。结果见表12。

4 讨　论

康达心颗粒主要由丹参、白芍、黄芪等10味中药组成，具有温阳利水、益气活血的作用，其中丹参、白芍是方中主要起药效作用的药材。丹参具有活血化瘀作用，其含有的水溶性成分（以丹酚酸B为主要活性成分）能够扩张冠状动脉，增加冠脉流量，改善心肌缺血、梗塞和心脏功能，调节心律，并能扩张外周血管，改善微循环^［6-7］；白芍有益气补虚、利水消肿的作用，其含有芍药苷、牡丹酚、芍药花苷等成分能够起到扩张冠状动脉，降低血压作用^［8］。因此本研究采用HPLC法测定丹酚酸B和芍药苷含量来控制制剂质量。

在康达心颗粒提取及成型工艺中，起初考虑同时测定丹酚酸B和芍药苷2个有效成分含量作为正交试验的评价指标，但在采用HPLC法测定康达心稠膏和颗粒的芍药苷及丹酚酸B含量时，发现在正交试验的各样品含有芍药苷含量基本一致，对试验的结果影响较小，所以最终舍去测定芍药苷含量这个评价指标，仅以丹酚酸B含量作为评价指标。

康达心颗粒提取工艺优化试验，主要考察浸泡时间、加水量、提取时间和提取次数4个因素，以干膏收率和丹酚酸B含量计算综合得分。结果表明：浸泡时间在0～1.5 h，综合得分升高，当超过1.5 h，相差不明显；加水量从6～10倍，综合得分升高，当加水量增加到10倍以上时变化较少；提取时间在1～2 h时间内，综合得分升高，当时间超过2 h后，综合得分反而降低；提取次数1～3次时，综合得分升高，当提取第3次及以上时，综合得分变化不明显。本研究最终确定了浸泡时间为0.5、1、1.5 h，加水量为药材量的6、8、10倍，提取时间为1、1.5、2 h，提取次数为1、2、3次，为正交试验因素水平的选择提供依据。

样品前处理时，本课题预实验曾经采用80%甲醇溶液提取供试品，用于含量测定。但该供试品溶液HPLC谱图有较多的干扰峰，不适用，因此最终采用20%甲醇溶液进行提取。HPLC法对芍药苷和丹酚酸B含量测定，在一定的含量范围内，线性关系良好；颗粒剂在8 h内基本稳定；精密度、重复性都较符合要求；颗粒剂中有效成分含量高，质量稳定。

参考文献

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基金资助

福建省科技厅引导性项目(2023Y0031)