电针犊鼻、内膝眼穴对膝骨关节炎大鼠软骨组织退变和自噬水平的影响

摘要

目的 观察电针犊鼻、内膝眼穴对膝骨关节炎(KOA)大鼠软骨组织退变和自噬水平的影响。方法取3月龄SPF级雄性SD大鼠36只，采用随机数字表法分为假手术组、模型组、电针组、电针+激活剂组、电针+抑制剂组和非穴位对照组，每组6只。除假手术组外，其余各组采用前交叉韧带切断术(ACLT)制备KOA动物模型。造模8周后，电针组予犊鼻、内膝眼穴电针治疗，30 min/次，1次/d,5 d/周，连续干预12周；电针+激活剂组、电针+抑制剂组在电针组干预基础上分别联合关节腔注射10μmol/L自噬激活剂雷帕霉素和5 mmol/L自噬抑制剂3-MA各50μL,1次/周，连续注射12周；非穴位对照组在犊鼻、内膝眼穴位旁开5 mm的非穴位处行电针治疗，操作和疗程同电针组；假手术组和模型组不做干预。干预完成后，采用苏木素-伊红(HE)染色及甲苯胺蓝染色观察软骨组织退变情况，qPCR法检测软骨组织基质金属蛋白酶-13(MMP-13) mRNA相对表达水平，Western blot检测软骨组织Beclin1、自噬相关蛋白5(Atg5)、微管相关蛋白1轻链3(LC3)及MMP-13蛋白表达量。结果模型组大鼠软骨组织发生明显退变，电针组和电针+激活剂组软骨组织退变程度较模型组明显减轻，电针+抑制剂组和非穴位对照组软骨组织退变程度改善不明显。与假手术组比较，模型组MMP-13 mRNA相对表达水平和蛋白表达均升高(P<0.05),Beclin1、Atg5蛋白表达均降低(P<0.05)。与模型组比较，电针组MMP-13 mRNA相对表达水平和蛋白表达均降低(P<0.05),Beclin1、Atg5蛋白表达及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ均升高(P<0.05)。与电针组比较，电针+激活剂组MMP-13 mRNA相对表达水平和蛋白表达均降低(P<0.05),Beclin1、Atg5蛋白表达及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ均升高(P<0.05)；电针+抑制剂组MMP-13 mRNA相对表达水平和蛋白表达均升高(P<0.05),Beclin1、Atg5蛋白表达及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ均降低(P<0.05)；非穴位对照组MMP-13 mRNA相对表达水平和蛋白表达均升高(P<0.05),Beclin1、Atg5蛋白表达及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ均降低(P<0.05)。结论 电针犊鼻、内膝眼穴可延缓KOA模型大鼠软骨组织退变，抑制MMP-13表达，促进自噬相关蛋白表达，提高自噬水平。

关键词

膝骨关节炎 / 电针 / 犊鼻穴 / 内膝眼穴 / 自噬 / 基质金属蛋白酶-13