高金线兰多糖提取工艺优化及抗氧化、免疫调节活性研究

摘要

目的 优化高金线兰多糖（polysaccharides of Anoectochilus elatus Lindl.,AEP）的提取工艺，观察其抗氧化和免疫调节活性。方法 通过单因素试验和响应面优化试验考察提取温度、料液比、提取时间和提取次数对AEP提取率的影响，确定热水法提取高金线兰多糖的最佳提取工艺；采用高效凝胶渗透色谱法（HPGPC）、PMP柱前衍生化高效液相色谱法（PMP-HPLC）和傅里叶红外光谱法（FT-IR）分析AEP的结构特征；通过1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）和自由基羟基（·OH）清除活性测定AEP的抗氧化活性，通过检测AEP对巨噬细胞活性、吞噬活性和一氧化氮（NO）及活性氧（ROS）释放的影响，评估其免疫调节活性。结果 提取温度、提取次数、提取时间和料液比均对热水法提取AEP的提取率有影响，最佳提取条件为提取温度100℃、料液比1∶25 g/mL、提取时间150 min、提取3次，在此条件下AEP提取率为（9.41±0.19）%。AEP分子量为13 499 Da，是一种杂多糖，主要包括甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖等。AEP质量浓度为4 mg/mL时，DPPH和·OH清除率分别为（55.68±0.12）%和（41.29±0.60）%。与空白组比较，62.5～1 000μg/mL AEP组细胞存活率无明显下降，且都在90%以上。与空白组比较，LPS组及125、250、500μg/mL AEP组细胞吞噬率、NO释放量和ROS生成量均有所提高（P<0.05）；与125μg/mL AEP组和250μg/mL AEP组比较，500μg/mL AEP组细胞吞噬率、NO释放量和ROS生成量均更高（P<0.05）。结论 优化后的提取工艺可提高AEP提取率；提取的AEP具有良好抗氧化活性和免疫调节能力。

关键词

高金线兰 / 多糖 / 响应面优化 / 抗氧化 / 免疫调节