栝楼桂枝汤调控NOX减轻脑缺血再灌注大鼠氧化应激损伤的机制研究

摘要

目的 探讨栝楼桂枝汤和通过调控烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶（NOX）改善脑缺血再灌注大鼠氧化应激损伤的作用机制。方法 将60只SD雄性大鼠按照随机数表法分为假手术组、模型组和栝楼桂枝汤组，每组20只。假手术组仅钝性分离皮下组织和肌肉，暴露颈总动脉、颈外动脉和颈内动脉，不进行线栓插入。模型组和栝楼桂枝汤组大鼠制备大脑左侧中动脉阻塞（MCAO）模型，栝楼桂枝汤组在模型制备成功后，按剂量7.08 mL/（kg·d）连续灌胃给予栝楼桂枝汤水煎液7 d,1次/d。假手术组和模型组则给予等量生理盐水灌胃，1次/d，共7 d。采用MRI观察脑梗死体积，HE染色观察脑组织的病理改变情况，以及分光光度法检测NOX活性水平；同时采用qPCR和Western blot实验检测NOX1、NOX2 mRNA转录水平和蛋白表达量；采用Caspase-3活性试剂盒检测其活性水平。结果 MRI结果提示，假手术组无缺血梗死区，模型组大鼠缺血侧出现较大片梗死区。栝楼桂枝汤组缺血侧脑组织的梗死体积较模型组明显降低（P<0.05）。病理形态学观察显示，假手术组脑组织结构完整，神经元形态正常；模型组缺血侧脑组织结构破坏明显，神经元排列紊乱、核固缩，伴大量细胞凋亡与坏死。同时，与假手术组比较，模型组脑组织NOX活性显著升高（P<0.05）,NOX1、NOX2的mRNA转录水平及蛋白表达量均显著上调（P<0.05），凋亡相关蛋白Caspase-3活性亦显著升高（P<0.05）。与模型组比较，栝楼桂枝汤组大鼠脑组织病理损伤明显减轻，细胞坏死减少；NOX、Caspase-3活性和NOX1、NOX2 mRNA转录与蛋白表达量均较模型组显著降低（P<0.05）。结论 GLGZD可能通过调节脑缺血再灌注后NOX介导的氧化应激反应来抑制神经元凋亡并减轻神经组织损伤。

关键词

脑缺血再灌注 / 栝楼桂枝汤 / 氧化应激 / NOX