幽门螺杆菌感染促进EAT小鼠甲状腺损伤与凋亡的实验研究

摘要

目的 分析幽门螺杆菌(Hp)感染对自身免疫性甲状腺炎(AIT)小鼠甲状腺损伤与凋亡的影响。方法 51只雌性C57BL/6J小鼠随机分为正常对照组(Control组)、实验性AIT组(EAT组)、Hp感染组(EAT+Hp组),每组17只；除Control组，其余两组小鼠均建立EAT模型；EAT造模成功后，EAT+Hp组小鼠在两周内接受了7次1×10～9 CFU/mL的Hp菌液灌胃，Control组和EAT组则同步给予等体积生理盐水；末次Hp干预后12周，采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠血清抗过氧化物酶抗体(TPOAb)、抗甲状腺球蛋白抗体(TGAb)、游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺素(FT4)、促甲状腺素(TSH),以及炎症因子白介素-17A(IL-17A)、白介素-10(IL-10)和转化生长因子-β1(TGF-β1)水平；苏木素-伊红(HE)染色评估甲状腺组织病理形态并进行炎症评分；原位末端标记法(TUNEL)检测小鼠甲状腺细胞凋亡情况；实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测甲状腺Fas与Caspase-3的mRNA表达水平；蛋白免疫印迹法(Western blot)和免疫组织化学(IHC)染色检测甲状腺Fas与裂解Caspase-3蛋白表达情况。结果 EAT模型小鼠呈现出甲状腺功能减退特征，血清FT3、FT4水平较Control组显著降低(P<0.05),同时伴有TSH代偿性升高(P<0.01),在此基础上，合并Hp感染进一步加剧了甲状腺功能损伤，FT4进一步下降(P<0.05),TSH水平也相应升高(P<0.05);在自身免疫应答方面，EAT组小鼠TPOAb水平较Control组显著上升(P<0.001),Hp感染促进了自身抗体的进一步生成，TPOAb与TGAb均较EAT组升高(P<0.05);炎症因子检测显示，EAT组促炎因子IL-17A明显高于Control组(P<0.01),而抗炎因子IL-10与TGF-β1则显著降低(P<0.05),Hp感染加剧了这种免疫失衡，使IL-17A进一步上升，IL-10与TGF-β1下降更为明显；组织病理学检查可见EAT组甲状腺结构破坏伴淋巴细胞浸润，Hp感染后损伤程度加重，炎症评分显著升高(P<0.05);在凋亡机制层面，荧光显微镜下见EAT+Hp组较EAT组凋亡阳性细胞表达增多，EAT组甲状腺组织中Fas与Caspase-3 mRNA表达均显著上调(P<0.001),Hp感染后Fas表达进一步升高(P<0.001);Western blot与免疫组织化学结果表明Hp感染促进Fas与裂解Caspase-3蛋白的表达，增强甲状腺细胞凋亡。结论 Hp感染可能破坏Th17/Treg平衡，加剧甲状腺细胞凋亡，从而进一步加重小鼠的AIT。

关键词

自身免疫性甲状腺炎 / 幽门螺杆菌 / 自身抗体 / 炎症因子 / 凋亡