七氟烷介导m6A修饰调控NMDA受体表达对小鼠围术期神经认知功能障碍的影响

摘要

目的 探讨七氟烷介导N6-甲基腺苷（m6A）修饰对围术期神经认知功能障碍（PND）小鼠N-甲基-D-天冬氨酸受体（NMDAR）表达的影响。方法 96只雄性C57BL/6小鼠随机分为空白对照组（C组，不做处理）、麻醉对照组（A组，吸入七氟烷）、假手术对照组（Sh组，吸入七氟烷+正中开腹）及手术组（S组，吸入七氟烷+肠系膜上动脉短暂夹闭）,Sh组与S组使用局部麻醉药进行围术期镇痛；根据术后处死时间（第7、14、21天）,随机将各组再分为三亚组（n=8）,采用旷场（OF）、物体识别记忆（ORM）、物体位置记忆（OLM）实验测定小鼠认知功能；苏木素-伊红（HE）染色观察小鼠海马组织学变化；比色法测定m6A的表达丰度；蛋白免疫印迹法（Western blot）法检测NMDAR的2B亚基（NR2B）、m6A去甲基化酶AlkB同源蛋白5（ALKBH5）表达水平。结果 与C₇组相比，Sh₇和S₇组新物体及位置转换物体探索时间辨别比（DR）降低（P<0.05）,海马神经元出现严重损伤，海马m6A表达丰度及NR2B表达降低（P<0.05）,ALKBH5蛋白表达增加（P<0.05）;A₇组DR值无差异，海马神经元损伤程度较轻，m6A表达丰度、NR2B及ALKBH5表达均无差异（P>0.05）;与C₁₄组相比，A₁₄、Sh₁₄、S₁₄组DR值无差异（P>0.05）,海马m6A表达丰度无差异（P>0.05）,神经元损伤改善；S₁₄组ALKBH5表达增加（P<0.05）,NR2B表达降低（P<0.05）;与C₂₁组相比，A₂₁、Sh₂₁、S₂₁组小鼠未出现物体识别记忆及位置记忆障碍，m6A表达丰度、NR2B及ALKBH5表达均无差异（P>0.05）。结论 ALKBH5介导的m6A去甲基化可能降低NR2B的表达，七氟烷可能影响m6A修饰调控NMDAR表达而参与PND的发生。

关键词

围术期神经认知功能障碍 / 七氟烷 / N6-甲基腺苷 / N-甲基-D-天冬氨酸受体 / AlkB同源蛋白5