重组鞭毛素蛋白诱导小鼠三阴性乳腺癌细胞铁死亡的研究

摘要

目的 探讨重组鞭毛素蛋白（rFliC）对小鼠三阴性乳腺癌（TNBC）4T1细胞铁死亡效应的影响。方法 将4T1细胞分为空白对照组（Control）、rFliC组以及添加铁死亡抑制剂（Fer-1）的rFliC+Fer-1组，采用CCK-8细胞增殖试验及克隆形成实验检测4T1细胞的增殖和存活能力；采用试剂盒检测4T1细胞丙二醛（MDA）、还原型谷胱甘肽（GSH）及亚铁离子(Fe²⁺)水平，通过透射电子显微镜观察4T1细胞线粒体形态学变化，采用线粒体膜电位检测试剂盒（JC-1）、C11-BODIPY 581/591荧光探针分别分析线粒体膜电位（MMP）、脂质活性氧（ROS）水平，采用蛋白免疫印迹法（Western blot）技术检测4T1细胞铁死亡相关蛋白胱氨酸-谷氨酸反向转运体亚基（XCT）、酰基辅酶A合成酶长链家族成员4（ACSL4）及转铁蛋白受体1（TfR1）的表达水平。结果 经rFliC处理的4T1细胞存活率和克隆形成效率受到明显抑制，且与铁死亡相关（P<0.05）;rFliC组中MDA、Fe²⁺水平升高、GSH水平下降（P<0.05）;透射电镜分析显示，rFliC组表现出线粒体体积减小、膜密度增加、嵴结构减少或消失等铁死亡现象；JC-1和C11-BODIPY 581/591荧光探针的分析结果表明，rFliC组4T1细胞MMP水平下降、ROS水平升高；rFliC能降低XCT、TfR1蛋白表达水平，提升ACSL4蛋白表达水平（P<0.05）。结论 rFliC能诱导小鼠TNBC 4T1细胞铁死亡。

关键词

重组鞭毛素蛋白 / 三阴性乳腺癌 / 铁死亡