分泌型卷曲相关蛋白5对高糖培养的大鼠肾小管上皮细胞Wnt4/β-catenin信号和EMT的影响

摘要

目的 观察高糖（HG）培养肾小管上皮细胞中分泌型卷曲相关蛋白5（SFRP5）对无翅基因相关整合位点家族成员4（Wnt4）/β-连环蛋白（β-catenin）信号通路及肾小管上皮细胞向间充质细胞转分化（EMT）的影响，探索其在肾纤维化发生发展中的作用及机制。方法 取对数生长期NRK-52E细胞分为正常糖（NG,5.5 mmol/L）组和高糖（HG,30 mmol/L）组，分别处理后，均在24、48及72 h的时间点收集各组细胞蛋白及RNA样本，Western blot检测SFRP5、Wnt4、第9位丝氨酸磷酸化的糖原合酶激酶-3β(p-GSK-3β^Ser9)、β-catenin、上皮细胞钙黏蛋白（E-cadherin）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）及Ⅳ型胶原蛋白（Col-Ⅳ）蛋白的表达，实时聚合酶链式反应（real-time PCR）检测SFRP5信使RNA（mRNA）的表达；对数期NRK-52E细胞中分别转染空载质粒（vector）及SFRP5过表达质粒（sfrp5）后HG下培养，分为HG+vector组和HG+sfrp5组，48 h后收集细胞蛋白样本，Western blot检测SFRP5、Wnt4、p-GSK-3β^Ser9、β-catenin、E-cadherin、α-SMA及Col-Ⅳ蛋白的表达。结果 HG组细胞中Wnt4、p-GSK-3β^Ser9、β-catenin、α-SMA及Col-Ⅳ蛋白表达较NG组对应时间点增多（P<0.05）,E-cadherin蛋白及SFRP5蛋白和mRNA表达较NG组对应时间点减少（P<0.05）;与HG+vector组比较，HG+sfrp5组细胞中p-GSK-3β^Ser9、β-catenin、α-SMA及Col-Ⅳ蛋白表达减少（P<0.05）,SFRP5及E-cadherin蛋白表达增加（P<0.05）。结论 过表达SFRP5可通过抑制Wnt4/β-catenin信号通路，缓解高糖环境下大鼠肾小管上皮细胞的EMT过程及纤维化相关表现。

关键词

纤维化 / 分泌型卷曲相关蛋白5 / β-连环蛋白 / 上皮细胞向间充质细胞转分化 / 肾纤维化