呼肠孤病毒通过CXCL10/CXCR3轴促进NK细胞活化及迁移的实验研究

摘要

目的 探讨呼肠孤病毒(Reo)是否通过CXCL10/CXCR3轴调控自然杀伤细胞(NK细胞)活化及向肿瘤细胞迁移。方法 将体外扩增的人源NK细胞分为Reo感染组(NK+Reo)和未感染对照组(NK),采用转录组测序技术(RNA-seq)检测两组细胞的差异表达基因，分析与NK细胞迁移相关的趋化因子受体CXCR3的表达变化；采用流式细胞术分析NK+Reo组中CXCR3和CD69的表达水平，免疫荧光染色检测NK细胞的CXCR3表达水平；采用定量聚合酶链反应(qPCR)和蛋白质印迹技术检测NK+Reo组CXCR3在mRNA和蛋白水平的表达量，qPCR和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测Reo感染的结直肠癌细胞(Reo-DLD-1)中CXCL10的mRNA表达和CXCL10分泌情况；采用Transwell迁移实验评估阻断CXCR3后NK+Reo细胞向肿瘤细胞迁移和侵袭能力的变化。结果 与NK组相比，NK+Reo组存在多个差异表达基因，其中趋化因子受体CXCR3的上调最为显著(P<0.05);与DLD-1细胞相比，Reo感染后的Reo-DLD-1细胞CXCL10分泌水平显著升高(P<0.05);阻断CXCR3或CXCL10可抑制NK+Reo细胞向肿瘤细胞的迁移和侵袭能力。结论 Reo可以通过上调CXCL10/CXCR3轴的信号传导调控NK细胞向肿瘤细胞的迁移，从而增强NK细胞的抗肿瘤活性。

关键词

自然杀伤细胞 / 呼肠孤病毒 / 趋化因子 / 细胞活化 / 迁移