艳山姜挥发油调控TXNIP/NLRP3信号改善高糖诱导视网膜色素上皮细胞焦亡

摘要

目的 研究艳山姜挥发油(EOFAZ)对高糖诱导人视网膜色素上皮细胞(ARPE-19)焦亡的改善作用。方法 通过25 mmol/L葡萄糖诱导ARPE-19细胞损伤模型，MTT法检测细胞存活率，流式细胞术检测细胞损伤程度，蛋白免疫印迹法检测凋亡相关斑点蛋白(ASC)、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1前体(Procaspase1)、裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(cleaved caspase1)、白细胞介素-1β(IL-1β)以及gasdermin D的N端结构域(GSDMD-NT)的表达，ELISA检测细胞培养上清中IL-1β的含量；为进一步研究EOFAZ是否通过硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)发挥作用，采用蛋白免疫印迹法和RT-qPCR法检测高糖及EOFAZ对ARPE-19细胞中TXNIP的影响，免疫共沉淀检测TXNIP与NLRP3的蛋白相互作用；将TXNIP-siRNA转染到ARPE-19细胞中，利用MTT以及流式细胞术检测ARPE-19细胞的损伤程度及细胞存活率，蛋白免疫印迹法检测焦亡相关蛋白的表达，ELISA检测细胞培养上清中IL-1β的含量。结果 EOFAZ明显减轻了高糖诱导的ARPE-19细胞损伤，与模型组相比细胞存活率升高(P<0.05);模型组焦亡蛋白的表达水平均上调，细胞培养上清中IL-1β的含量增加(P<0.05);给予EOFAZ后，上述蛋白的表达水平下调，细胞培养上清中IL-1β含量降低(P<0.05);EOFAZ可下调模型组细胞中TXNIP的表达(P<0.05),并且降低TXNIP与NLRP3的结合能力；在ARPE-19细胞中转染TXNIP-siRNA后，与si-TXNIP+模型组相比，si-TXNIP+EOFAZ组中焦亡相蛋白表达水平、细胞损伤程度、IL-1β的含量差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 艳山姜挥发油通过调控TXNIP/NLRP3信号抑制高糖诱导的视网膜色素上皮细胞焦亡。

关键词

糖尿病视网膜病变 / 焦亡 / 视网膜色素上皮细胞 / 硫氧还蛋白相互作用蛋白 / 高糖 / 艳山姜挥发油