5-氮杂-2′-脱氧胞苷上调高糖培养的NRK-52E细胞中SFRP5表达后抑制β-catenin信号

摘要

目的 观察高糖环境下肾小管上皮细胞中分泌型卷曲相关蛋白5（SFRP5）与DNA甲基转移酶（DNMTs）的表达关系，探讨5-氮杂-2′-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）是否通过抑制DNMTs表达、上调SFRP5表达，从而抑制β-连环蛋白（β-catenin）信号通路及上皮间质转化（EMT）来发挥其抗肾纤维化作用。方法 取对数生长期NRK-52E细胞分为正常糖组（5.5 mmol/L,NG）和高糖组（30 mmol/L,HG）,收集细胞蛋白及RNA样本，Western blot检测SFRP5及DNMTs蛋白的表达，实时聚合酶链反应（PCR）检测SFRP5的mRNA表达；取HG培养的对数期NRK-52E细胞分为HG组和HG+5-Aza-CdR组（5-Aza-CdR,80μmol/L）,收集细胞蛋白及RNA样本，Western blot检测第9位丝氨酸磷酸化的糖原合酶激酶-3β(p-GSK-3β^Ser9)、β-catenin、上皮细胞钙黏蛋白（E-cadherin）、α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）及Ⅳ型胶原蛋白（Col-Ⅳ）的表达；实时PCR检测SFRP5的mRNA表达。结果 相较NG组，HG组细胞中SFRP5蛋白和mRNA表达减少（P<0.05）,DNMT1、DNMT3a、DNMT3b蛋白表达增多（P<0.05）,细胞中SFRP5与DNMT1、DNMT3a、DNMT3b呈负相关；相较HG组，HG+5-Aza-CdR组细胞中SFRP5蛋白和mRNA、E-cadherin蛋白表达增高（P<0.05）,DNMT1、DNMT3a、DNMT3b、p-GSK-3β^-Ser9、β-catenin、α-SMA及Col-Ⅳ蛋白表达降低（P<0.05）。结论 高糖培养的NRK-52E细胞中，伴随SFRP5表达降低DNMTs表达升高，5-Aza-CdR可能通过降低DNMTs表达而促进SFRP5表达，进而抑制β-catenin信号通路并改善肾小管上皮EMT。

关键词

分泌型卷曲相关蛋白5 / DNA甲级转移酶 / 5-氮杂-2′-脱氧胞苷 / β-连环蛋白