球毛壳菌DX-THS3原生质体制备及遗传转化体系建立

摘要

该文系统优化了不产孢球毛壳菌（Chaetomium globosum）DX-THS3原生质体的制备流程，并成功构建了高效、可重复的遗传转化体系.通过单因素优化实验，确定原生质体制备最佳参数组合：以0.7 mol·L^-1的NaCl为渗透压稳定剂，使用质量分数为3.0%的陈酿酶（VinoTaste Pro）在30℃下酶解3.0 h.该方案制备的原生质体形态均一、产量高且活力良好.基于此优化体系，采用PEG-CaCl₂介导的原生质体转化法，成功将携带增强型绿色荧光蛋白报告基因（eGFP）和苯菌灵抗性基因（BenA）的质粒载体Pan-Ret-BenA导入DX-THS3.通过1μg·mL^-1苯菌灵抗性筛选、特异性PCR扩增与测序验证，获得了稳定遗传的阳性转化子.该文在球毛壳菌DX-THS3中建立了稳定可靠的遗传转化体系，为其功能基因组解析、代谢工程改造及生物活性潜力挖掘奠定了技术基础；该优化策略亦为其他难转化真菌的遗传操作提供了重要参考.

关键词

球毛壳菌 / 原生质体 / 遗传转化 / PEG介导转化

基金资助

国家自然科学基金(32360080); 江西省自然科学基金(20242BAB20286); 江西省研究生创新专项资金(YC2024-S694); 江西科技师范大学大型仪器设备开放共享基金资助项目