miRNA-92a通过mTOR糖酵解调节CD4⁺T细胞在多发性硬化中的机制研究

摘要

目的:研究microRNA-92a（miRNA-92a或miR-92a）在实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）小鼠中枢神经系统CD4⁺ T细胞分化中的作用，以及miR-92a通过糖酵解途径调控T淋巴细胞分化的过程，并以哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）为下游关键分子靶点，探讨miR-92a影响EAE病理过程的分子机制。方法:利用C57BL/6J或miR-92a^-/-小鼠成功构建EAE模型后，分离脊髓CD4⁺ T细胞体外培养，采用流式细胞术检测1型辅助性T（Th1）细胞1、Th2、Th17和调节性T细胞（Treg）细胞比例，利用Seahorse能量代谢分析仪检测细胞糖酵解水平，利用RT-qPCR检测相关基因变化水平；诱导体外培养的初始CD4⁺ T细胞分化为Th1或Treg细胞，在此基础上调控miR-92a水平并结合糖酵解激动剂或抑制剂，检测细胞分化比例；利用Western Blot检测C57BL/6J或miR-92a^-/-小鼠CD4⁺ T细胞中mTOR和磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）表达变化，用质粒转染过表达mTOR后，检测CD4⁺ T细胞糖酵解水平和细胞分化水平。结果:miR-92a可导致EAE后CD4⁺ T细胞分化比例失衡，即Th1和Th17细胞比例增加，Th2和Treg细胞比例减少；miR-92a通过促进糖酵解调控CD4⁺ T细胞分化，抑制糖酵解后促进Treg细胞分化；miR-92a表达的增加能够通过激活mTOR信号通路提高细胞糖酵解水平，从而影响细胞分化。结论:miR-92a通过激活mTOR信号通路促进T淋巴细胞糖酵解，破坏CD4⁺ T细胞分化平衡，从而参与多发性硬化（MS）和EAE的病理过程。

关键词

多发性硬化 / 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 / 神经炎症 / 糖酵解 / miRNA-92a / T细胞 / 小鼠