大鼠脑缺血再灌注损伤后肠道不同节段内褪黑素受体的变化

摘要

目的:脑缺血再灌注损伤（CIRI）可通过脑-肠轴对胃肠道等远隔器官造成损害。已知褪黑素可通过激活特定的受体发挥神经保护作用。然而，脑组织缺血后胃肠道中褪黑素受体的变化及其与肠道损伤的关系仍不清楚。方法:将24只成年雄性SD大鼠随机分为假手术（Sham）组和CIRI组，CIRI组采用Zea-Longa线栓法制备脑缺血再灌注模型，缺血2 h,再灌注24 h后收集大鼠空肠、回肠及结肠组织。采用2,3,5-三苯四唑氯（TTC）染色和HE染色观察CIRI后脑组织和肠组织的损伤程度，免疫荧光染色观察肠道封闭蛋白1（ZO-1）和Claudin5的表达，实时荧光定量PCR（RT-qPCR）、免疫荧光染色和Western Blot检测褪黑素受体1（MT1）和褪黑素受体2（MT2）的表达变化。通过一般线性回归分析CIRI后褪黑素受体与肠道紧密连接蛋白的相关性。结果:TTC染色显示，CIRI组大鼠脑梗死面积明显高于Sham组；HE染色显示，CIRI组大鼠肠绒毛断裂、缩短，杯状细胞减少。免疫荧光染色结果显示CIRI组大鼠肠组织内ZO-1⁺和Claudin5⁺的表达明显低于Sham组（P<0.05）;RT-qPCR显示，CIRI组MT1和MT2 mRNA的表达明显低于Sham组（P<0.05）,其中，结肠组织的降低最为明显。免疫荧光染色和Western Blot结果也显示，与Sham组相比，CIRI组MT1和MT2蛋白的表达显著降低（P<0.05）;一般线性回归分析显示，Sham组与CIRI组的MT1⁺和MT2⁺平均荧光强度的差值与两组间Claudin5⁺和ZO-1⁺平均荧光强度的差值均呈正相关。结论:CIRI后空肠、回肠和结肠内MT1和MT2的表达均降低，且结肠组织降低的最为显著，提示脑卒中的愈后不良可能与褪黑素受体的降低有一定相关性。

关键词

脑缺血再灌注损伤 / 脑-肠轴 / 肠 / 褪黑素受体 / 大鼠

基金资助

山东省医药卫生科技发展计划项目(202001020642); 山东省中医药科技发展计划(Q-2023071)