三种去除原代星形胶质细胞中小胶质细胞方法的比较

摘要

目的:本研究拟对3种去除原代星形胶质细胞培养物中小胶质细胞的方法进行比较分析，以探讨不同纯化方法的特点，为研究者选择合适的原代星形胶质细胞培养方法提供依据。方法:将SD乳鼠大脑皮质细胞解离并铺板，根据纯化方法的不同分组为：未纯化组(Control组)、传统振荡纯化组(TO组)、阿糖胞苷(AraC)+TO组和AraC+L-亮氨酸甲酯(LME)组。光学显微镜下观察各组细胞传代后细胞形态，并通过免疫荧光染色检测胶质纤维酸性蛋白(GFAP)阳性细胞比例。AlamarBlue HS检测各组细胞传代后细胞活力。细胞计数统计不同纯化处理后获得的细胞产量。结果:相较于Control组，TO组细胞传代后的细胞纯度(P<0.0001)和细胞活力(P<0.0001)显著增加，纯化后获得的细胞总量显著下降(P<0.001),这些趋势在AraC+TO和AraC+LME组更加明显，AraC+TO和AraC+LME组细胞传代后的细胞纯度(P<0.0001或P<0.0001)和细胞活力(P<0.01或P<0.001)均显著高于TO组，而获得的细胞总量相较于TO组均有显著下降(P<0.01或P<0.01),AraC+TO和AraC+LME组之间无显著差异。结论:TO方法获得富含星形胶质细胞的培养物(纯度>90%),并且细胞产量高，可以应用于常规细胞研究，而AraC+TO和AraC+LME方法获得高度富集的星形胶质细胞培养物(纯度>99%),可以应用于神经炎症背景下星形胶质细胞精确作用研究。

关键词

原代培养 / 星形胶质细胞 / 小胶质细胞 / 阿糖胞苷 / L-亮氨酸甲酯

基金资助

陕西省科技计划项目(2024SF-YBXM-045); 陕西省中医药管理局项目(2022-SLRH-LJ-013); 西安市科技计划项目(24YXYJ0055); 西安市卫生健康委员会中医药科研项目(SZJ202403)