促食欲素A通过调控钙信号通路抑制脑缺血后海马神经元凋亡

摘要

目的:探讨脑缺血后促食欲素A（OXA）对海马区神经元的影响及其分子机制。方法:利用改良大鼠双侧颈总动脉闭塞法（BCAO）制备大鼠脑缺血模型。利用尼氏染色观察大鼠海马区神经元形态改变，利用免疫荧光染色观察各组脑组织OXA的表达；利用Western blot检测促食欲素受体1（HCRTR 1）、双皮质素抗体（DCX）、caspase-3、超氧化物歧化酶（SOD）表达水平。利用氧糖剥夺（OGD）制备HT22细胞损伤模型并用OXA处理，利用免疫荧光染色观察caspase-3的表达；利用Western blot检测caspase-3、caspase-9、caspase-8以及钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶II（CaMKII）及其磷酸化水平（pCaMKII）的表达；利用流式细胞术检测各组细胞中活性氧（ROS）含量变化；利用钙成像技术检测各组细胞内Ca²⁺内流情况。结果:在动物水平，与Sham组相比，BCAO组海马区神经细胞形态损伤明显，且海马区OXA、HCRTR 1及caspase-3表达水平明显升高，而DCX和SOD表达水平明显降低（P<0.05）。在细胞水平，与Control组相比，OGD组HT22细胞中caspase-3和caspase-9的表达水平明显升高（P<0.05）,SOD表达水平明显降低（P<0.05）,ROS的含量明显升高（P<0.05）, CaMKII磷酸化水平明显升高（P<0.05）,钙信号荧光强度升高；与OGD组相比，OXA组caspase-3和caspase-9的表达水平明显降低（P<0.05）, SOD表达水平明显升高（P<0.05）,ROS含量明显降低（P<0.05）, CaMKII磷酸化水平明显降低（P<0.05）,钙信号荧光强度降低。结论:OXA可能通过调节钙信号通路抑制脑缺血导致的海马神经元凋亡。

关键词

促食欲素 / 脑缺血 / 钙信号通路 / 海马 / 凋亡 / 大鼠