慢病毒介导的Shh靶向shRNA促进施万细胞迁移

摘要

目的:探讨音猬因子(Shh)对施万细胞迁移的影响及机制。方法:设计靶向Shh基因的发夹状RNA(shRNA)序列并包装成重组慢病毒(LV-Shh-shRNA),感染RSC96细胞，通过Western blot筛选出沉默效率高的shRNA序列进行实验。采用Transwell迁移实验和划痕实验比较对照组(sh-scramble)和Shh沉默组(sh-Shh)细胞的迁移效率；通过TRITC-鬼笔环肽染色观察细胞伪足形成；通过转录组分析探究沉默Shh对施万细胞迁移影响的具体机制。结果:筛选出高效靶向Shh的shRNA序列，并成功构建可显著降低Shh表达的慢病毒。与对照组相比，Shh沉默显著促进施万细胞迁移，促进施万细胞伪足形成；转录组分析结果显示Shh沉默组与对照组之间的差异表达基因(DEGs)数量为1837个，其中1038个基因表达上调，799个基因表达下调。京都基因与基因组百科全书(KEGGs)通路富集分析结果发现沉默Shh后DEGs主要富集在癌症中的蛋白聚糖、MAPK信号通路和PI3K-Akt信号通路。基因本体(GO)分析结果发现沉默Shh后DEGs在“变形虫型细胞迁移”和“上皮细胞迁移”生物学过程显著富集。结论:沉默Shh促进施万细胞迁移。

关键词

音猬因子 / 基因沉默 / 迁移 / 伪足 / 施万细胞