促肾上腺皮质激素释放激素参与应激状态下痒觉调控的机制研究

摘要

目的:初步阐明促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)参与痒觉调控的脊髓机制以及CRH在慢性应激促痒效应中的作用及受体机制。方法:给予小鼠鞘内注射CRH及其受体(CRHRs)激动剂或拮抗剂，观察其对组胺所致痒行为的影响。利用短发夹RNA(shRNA)干扰病毒载体分别特异性敲减脊髓背角的CRHR1和CRHR2,结合行为药理学方法，观察小鼠痒行为的改变。通过RNAscope染色观察脊髓背角内CRHR1和CRHR2分别与胃泌素释放肽(GRP)和囊泡γ-氨基丁酸转运体(Vgat)的共表达情况。制作慢性不可预知温和应激(CUMS)模型，经腹腔分别注射CRHR1拮抗剂或CRHR2激动剂，观察小鼠组胺痒及抑郁样行为的改变。在CUMS造模前2周条件性敲减小鼠脊髓背角内CRHR1和CRHR2,观察对CUMS促痒行为的影响；在CUMS造模过程的第1、2、3、4周分别腹腔注射1次CRHR1拮抗剂NBI27914,观察其对小鼠CUMS造模结果及痒行为的影响。结果:鞘内注射CRH通过CRHR2介导抑制组胺引起的急性痒。敲减小鼠脊髓背角的CRHR1后，鞘内注射CRH的抑痒作用仍存在；而CRHR2敲减后，CRH的抑痒作用被拮抗且表现出较为明显的促痒效应。RNAscope染色结果显示，脊髓背角内CRHR1主要与痒觉特异性兴奋性神经肽GRP共表达，CRHR2则主要与抑制性神经元标志物Vgat共表达。CUMS状态下，小鼠的自发痒和组胺诱发痒的搔抓次数，以及在悬尾实验和强迫游泳实验中的不动时间均显著增加，CRH含量在眼动脉血中亦明显增加；腹腔注射CRHR1拮抗剂NBI27914或CRHR2激动剂Urocortin II,CUMS的促痒效应被阻断，抑郁样行为也明显改善。敲减小鼠脊髓背角的CRHR1后，CUMS的促痒效应消失，而敲减CRHR2后，CUMS的促痒效应依然存在且促痒效果更加明显；每周腹腔注射1次、持续4周注射CRHR1拮抗剂后，CUMS刺激，小鼠未出现明显的抑郁样行为，也未出现痒觉敏感性增加的现象。结论:在脊髓水平，CRH可能分别通过CRHR1激活GRP、通过CRHR2激活GABA,发挥促痒和抑痒作用，并分别参与慢性应激促痒(CRHR1介导)和急性应激抑痒(CRHR2介导)效应；同时CRHR1也参与了CUMS慢性应激模型小鼠抑郁样行为的形成，CRHR2则具有抗抑郁作用。

关键词

促肾上腺皮质激素释放激素 / 痒 / 慢性不可预知温和应激 / 抑郁 / 小鼠