南极假丝酵母脂肪酶B在黑曲霉中的表达及酶学性质研究

摘要

为实现南极假丝酵母脂肪酶B（Candida antarctica lipase B,CALB）在黑曲霉（Aspergillus niger）中的表达，研究选用黑曲霉高效分泌信号肽SglaA、SpepB和融合蛋白XynB分别构建3个CALB的表达载体，并转入黑曲霉TH-2（ΔasaA::pyrG）、TH-2（ΔasaA::scerv29ΔprtT::pyrG）中，得到6株黑曲霉重组菌株。摇瓶发酵重组菌株并进行酶活力检测，发现以SglaA为信号肽的CALB酶活是以SpepB为信号肽酶活的105%和108%；以XynB为融合蛋白的CALB酶活是未融合XynB的114%～123%；敲除prtT的CALB重组菌株酶活是未敲除菌株酶活的102%～105%。以SglaA为信号肽，XynB为融合蛋白并转入TH-2（ΔasaA::scerv29ΔprtT::pyrG）的重组菌株酶活力较高，发酵至第12天为21.78±0.77 U·mL^-1。对重组CALB进行酶学性质分析，其最适温度为50℃，在30～50℃范围内温度能保持70%以上的相对酶活力；最适pH为8.0，在p H 6.0～8.0时较为稳定并且能保持80%左右的相对酶活力，Na⁺、K⁺和甘氨酸对CALB的酶活性产生了增强效果。

关键词

南极假丝酵母脂肪酶B / 黑曲霉 / 信号肽 / 酶活力