2型糖尿病胰腺癌裸鼠模型的建立及活体成像观察

摘要

目的 建立可动态观察成瘤过程并进行体内研究的2型糖尿病（T2DM）胰腺癌裸鼠模型。方法 首先，通过慢病毒载体GV260转染人胰腺癌细胞（PANC-1细胞）构建能稳定表达萤火虫荧光素酶的胰腺癌细胞株（PANC-1-Luc细胞）。然后，将36只SPF级裸鼠随机分为对照组（n=12，血糖正常的胰腺癌裸鼠）和模型组（n=24,T2DM胰腺癌裸鼠）。对照组：先给予繁殖饲料喂养，之后将PANC-1-Luc细胞异位种植于裸鼠皮下；模型组：先给予高脂饲料喂养联合腹腔注射1%STZ，之后将PANC-1-Luc细胞异位种植于裸鼠皮下。用荧光活体成像系统和人工测量法同步动态监测2组裸鼠胰腺癌生长情况，绘制肿瘤生长曲线、分析荧光值与肿瘤体积的关系。显微镜下观察裸鼠皮下肿瘤及胰岛，验证造模是否成功；同时，通过免疫组化检测肿瘤组织Ki-67的表达来分析高血糖对裸鼠胰腺癌生长的影响。正态分布计量资料组间比较采用成组t检验，非正态分布计量资料组间比较采用Mann-Whitney U检验。结果 确定PANC-1细胞慢病毒载体稳定转染的最佳病毒滴度为5×107 TU/mL，用嘌呤霉素筛选的最佳浓度为20μg/mL、最佳筛选时间为9天；PANC-1-Luc细胞的荧光值与细胞数量呈线性正相关，线性方程为y=42.56x-42 504(r=0.977,P=0.004)。T2DM裸鼠模型血糖值为23.05(19.25～26.40)mmol/L，且每只裸鼠的血糖均高于11.1 mmol/L，与对照组裸鼠血糖值[6.15(5.20～7.30)mmol/L]相比，差异有统计学意义（Z=-8.45,P<0.001）。与对照组相比，模型组胰腺组织内胰岛数量减少、体积减小、形状不规则、边界模糊，同时移植瘤病理学检查确认镜下为胰腺癌组织，可判定T2DM裸鼠胰腺癌模型造模成功。模型组皮下肿瘤大小与荧光值呈线性正相关，线性方程为y=232 348 691x-8 258 608(r=0.911,P=0.031)；模型组移植瘤Ki-67免疫组化阳性率显著高于对照组[（50.333±7.808）%vs(15.917±4.055)%,t=13.55,P<0.001]，说明模型组肿瘤增殖较快。结论 本研究所构建的T2DM裸鼠胰腺癌模型可模拟T2DM背景下胰腺癌发生、发展的病理过程，动态观察高血糖对体内胰腺癌细胞生长的影响，从而为T2DM背景下胰腺癌发生、发展的体内研究提供新的实验载体。

关键词

糖尿病, 2型 / 胰腺肿瘤 / 疾病模型,动物