锚蛋白重复序列22(ANKRD22)对人肝癌细胞的影响及其机制

摘要

目的 探讨锚蛋白重复序列22(ANKRD22)对人肝癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其分子机制。方法 通过TCGA数据库分析正常肝组织及肝细胞癌组织中ANKRD22的表达水平及其与预后的关系。通过qRT-PCR和Western Blot检测人正常肝细胞（L-02）和人肝癌细胞系（Huh7、Hep G2、MHCC-97H、SK-HEP-1、SMMC-7721）中ANKRD22的表达情况。通过CCK-8、EdU、划痕实验及Transwell检测ANKRD22对肝癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。通过Western Blot检测ANKRD22与细胞周期蛋白、EMT相关蛋白之间的关系。通过KEGG、ssGSEA分析进一步探究ANKRD22在肝癌细胞中的作用机制，并进行实验验证。计量资料两组间比较采用成组t检验，多组间比较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用LSD-t检验。结果 TCGA数据库中ANKRD22在肝细胞癌组织中较正常肝组织高表达（t=5.083,P<0.05），且ANKRD22高表达患者的总生存期及疾病相关生存期均显著低于ANKRD22低表达的患者（P值均<0.05）。肝癌细胞系中ANKRD22的表达量均高于正常肝细胞（P值均<0.05）。增殖实验结果提示，ANKRD22过表达组的EdU阳性率、增殖速度均高于空载对照（Vector）组（t值分别为19.60、6.72,P值均<0.001）;si-ANKRD22#2组及si-ANKRD22#3组的EdU阳性率、增殖速度较siNC组均降低（P值均<0.001）。Cyclin E1、Cyclin D1、CDK7、CDK4在过表达组中表达高于Vector组（t值分别为3.54、4.95、6.34、5.19,P值均<0.01）；在si-ANKRD22#2组及si-ANKRD22#3组中表达均低于si-NC组（P值均<0.001）。P27在过表达组中表达低于Vector组（t=6.12,P<0.001），在si-ANKRD22#2组及si-ANKRD22#3组中表达均高于si-NC组（P值均<0.001）。侵袭、迁移实验结果提示，ANKRD22过表达组的迁移速度、穿膜数量（迁移组和侵袭组）均高于Vector组（t值分别为5.01、25.60、3.67,P值均<0.05）;si-ANKRD22#2组及si-ANKRD22#3组的迁移速度、穿膜数量（迁移组和侵袭组）较siNC组均降低（P值均<0.01）。N-cadherin、Vimentin、Snail在过表达组中表达高于Vector组（t值分别为12.13、8.85、13.97,P值均<0.001），在si-ANKRD22#2组及si-ANKRD22#3组中表达均低于si-NC组（P值均<0.001）;E-cadherin在过表达组中表达低于Vector组（t=4.98,P<0.01），在si-ANKRD22#2组及si-ANKRD22#3组中表达均高于si-NC组（P值均<0.001）。KEGG富集分析及ssGSEA分析提示，ANKRD22在肝细胞癌中与PI3K/AKT/mTOR信号通路相关，在过表达组中，p-AKT/AKT、p-PI3K/PI3K、p-mTOR/mTOR均较Vector组升高（t值分别为12.21、3.43、9.75,P值均<0.01）；在si-ANKRD22#2组及si-ANKRD22#3组中表达均低于si-NC组（P值均<0.001）。结论 ANKRD22在肝癌细胞中高表达，能促进肝癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力，并且能促进PI3K/AKT/mTOR信号通路的激活。

关键词

癌,肝细胞 / 锚蛋白重复 / 细胞增殖 / 细胞运动