NLRP3基因敲减对高脂高糖饮食诱导的非酒精性脂肪性肝炎小鼠模型的影响

摘要

目的 探讨NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)基因敲减对高脂高糖诱导的非酒精性脂肪性肝炎（NASH）小鼠模型的影响。方法 将44只小鼠随机分为正常饮食组（CON）20只，高脂高糖造模组（HFHC）24只。造模14周末，随机选取4只HFHC组小鼠进行腺相关病毒9(AAV9)尾静脉注射预实验，4周后验证NLRP3敲减模型是否成功。18周末确认敲减成功后，对剩余40只小鼠进行AAV9一次性尾静脉注射，分为CON+NLRP3敲减阴性对照组（CON+NLRP3-NC）、CON+NLRP3敲减组（CON+NLRP3-KD）、HFHC+NLRP3-NC及HHFHC+NLRP3-KD组，每组10只，继续造模6周。24周末取材观察炎症小体活化效应，检测小鼠体质量、肝质量、肝指数及糖代谢（空腹血糖、空腹胰岛素及HOMA-IR指数）指标；检测小鼠肝脂质含量（肝组织TG及油红O染色）、肝脏炎症（血清ALT活性、HE染色及炎症相关基因）及肝纤维化（天狼星红染色及纤维化相关基因）指标。计量资料多组间比较使用单因素方差分析，进一步两两比较采用LSD-t检验。结果 与CON+NLRP3-NC组相比，Western Blot结果提示，HFHC+NLRP3-NC组的NLRP3、pro-Caspase1、Caspase1、ASC及IL-1β蛋白水平均升高，HFHC+NLRP3-KD组均降低（P值均<0.05）;HFHC+NLRP3-NC组小鼠体质量、肝质量、肝指数及糖代谢指标均有不同程度升高，HFHC+NLRP3-KD组均显著改善（P值均<0.05）；在肝脂肪沉积方面，与CON+NLRP3-NC组相比，HFHC+NLRP3-NC组肝脏TG明显增高，油红O染色显示大量红色脂滴，HFHC+NLRP3-KD组肝脏TG及肝脂滴数量显著减少（P值均<0.01）；在肝脏炎症方面，HFHC+NLRP3-NC组血清ALT，非酒精性脂肪性肝病活动度（NAS）评分及炎症相关基因均较CON+NLRP3-NC组明显升高，HFHC+NLRP3-KD组均明显降低（P值均<0.01）；在肝纤维化方面，HFHC+NLRP3-NC组肝胶原纤维面积以及纤维化相关基因均较CON+NLRP3-NC组明显升高，HFHC+NLRP3-KD组纤维化相关基因均明显降低（P值均<0.05），胶原纤维面积虽有降低趋势但差异无统计学意义（P>0.05）。结论 NLRP3基因敲减可显著改善高脂高糖饮食诱导的NASH小鼠模型肝脂肪沉积及炎症。

关键词

非酒精性脂肪性肝病 / NLR家族,热蛋白结构域包含蛋白3 / 膳食,高脂 / 炎症 / 小鼠,近交C57BL

基金资助

国家自然科学基金面上项目（82174040）; 上海中医药大学关键领域优秀博士培育项目（2-089）; 上海市宝山区科学技术委员会医学卫生项目（21-E-63）