下瘀血汤对高脂饮食诱导的非酒精性脂肪性肝病小鼠模型的治疗作用及机制

摘要

目的 探讨下瘀血汤调控核苷酸结合寡聚化结构域样受体含pyrin结构域蛋白6(NLRP6)抑制高脂饮食（HFD）诱导的小鼠非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）的作用机制。方法 15只雄性C57BL/6小鼠随机分为低脂饮食（LFD）组、HFD组和下瘀血汤-HFD(XYXD)组，每组各5只。测量肝功能指标ALT和AST、血脂代谢指标TG、TC水平；肝组织经过HE染色、油红O染色，观察小鼠组织形态、脂滴沉积；实时荧光定量PCR检测肝组织中炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6及NLRP6表达水平；Western Blot检测NLRP6、NF-κB和NF-κB p65蛋白水平；免疫组化检测NLRP6和CD68表达。棕榈酸（PA）、脂多糖（LPS）和下瘀血汤含药血清处理鼠Raw264.7细胞，检测炎症情况。计量资料多组间比较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用LSD-t检验。结果 与LFD组比较，HFD组血清ALT、AST和TC、TG水平显著升高（P值均<0.05）。肝组织病理学显示，HFD组肝脂肪变性明显，NAS评分显著升高（P<0.05）；实时荧光定量PCR结果显示，IL-1β、IL-18等炎症相关因子显著升高，NLRP6表达显著下调（P值均<0.05）。免疫组化显示NLRP6表达与巨噬细胞标志物CD68重合。Western Blot显示，NLRP6表达下调后，磷酸化的NF-κB p65(p-NF-κB p65)显著上调（P<0.05）。与HFD组相比，下瘀血汤可有效改善HFD小鼠的肝脏炎症，上调NLRP6的表达，下调p-NF-κB p65(P<0.05)。PA处理Raw264.7细胞后下调NLRP6，促进炎症进展（P<0.05）；下瘀血汤处理可上调NLRP6，抑制炎症和NF-κB(P<0.05)。结论 下瘀血汤可显著改善HFD诱导NAFLD小鼠模型的肝脂肪变性和炎症，调控NLRP6/NF-κB减轻巨噬细胞活化可能是其作用机制之一。

关键词

非酒精性脂肪性肝病 / 下瘀血汤 / 巨噬细胞 / NLR蛋白质类 / 小鼠,近交C57BL

基金资助

国家自然科学基金面上项目（82004106,81873136）; 普陀医院人才类项目（2022-RCJC-04,2022-RCJC-02）; 上海市自然基金（20ZR1450300）; 上海市普陀区自主创新项目（ptkwws202223,ptkwws202112）; 上海市第六人民医院医疗集团科研基金（21-ly-02）; 成都中医药大学杏林学者（YYZX2020117）; 上海市中医药高层次人才引领计划[（2021-2023）-0403]