平足蛋白（PDPN）在肝星状细胞活化以及肝纤维化中的作用分析

摘要

目的 探究平足蛋白（PDPN）在肝星状细胞活化以及肝纤维化中的作用，并对其机制进行初步探讨。方法 收集2019年9月—2022年6月首次就诊于上海中医药大学附属普陀医院感染科的75例慢性乙型肝炎患者肝活检组织样本，实时定量PCR(RT-PCR)和免疫组化检测PDPN在不同肝纤维化分期患者肝组织中的表达。12只雄性C57/BL6小鼠随机分为正常组和模型组，每组各6只。模型组腹腔注射含10%CCl_4，对照组注射等体积橄榄油共6周，HE染色、天狼星红染色观察肝组织病理学变化，分离小鼠肝脏原代细胞，检测PDPN mRNA在各类型细胞中表达；使用PDPN蛋白处理小鼠原代肝星状细胞，并使用NF-κB抑制剂BAY11-7082处理，分析PDPN诱导肝星状细胞炎症因子表达情况。计量资料2组间比较采用成组t检验，多组间比较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用LSD-t检验。两组数据相关性分析采用Spearman相关性分析法。结果 慢性乙型肝炎患者肝活检样本中，PDPN mRNA在正常肝脏中表达较低，S3、S4期肝组织中表达显著升高，与正常肝组织比较差异均有统计学意义（P值均<0.001）；免疫组化染色结果显示，PDPN阳性表达主要集中在纤维间隔及肝窦，S4期肝组织PDPN阳性面积比S0期表达显著升高（t=8.892,P=0.001）。正常组小鼠中PDPN主要在肝窦表达少许，在CCl_4模型小鼠中PDPN表达显著升高（t=0.95,P<0.001），主要在纤维间隔表达；RT-PCR结果显示，PDPN mRNA在CCl_4模型小鼠中显著升高（t=11.25,P=0.002）。与肝细胞、肝星状细胞、Kupffer细胞和肝内胆管细胞相比，PDPN在肝窦内皮细胞中明显高表达（F=20.56,P<0.001）;PDPN蛋白处理小鼠原代肝星状细胞15 min，炎症相关因子TNF-α、CCL3、CXCL1和CXCR1的m RNA表达，与对照组相比均显著升高（P值均<0.05）,BAY11-7082(NF-κB信号抑制剂)处理后，上述炎症指标水平均明显下降（P值均<0.05）。结论 在肝纤维化中主要表达在肝窦内皮细胞的PDPN增加，其通过NF-κB信号调节肝星状细胞活化，促进肝纤维化进展。

关键词

肝纤维化 / 肝星状细胞 / 肝窦内皮细胞 / 平足蛋白

基金资助

上海市自然科学基金（20ZR1450300）; 国家自然科学基金（82004106）; 上海市普陀区自主创新项目（ptkwws202112,ptkwws202223）; 上海市普陀区中心医院科研百人计划（2022-RCJC-02,2022-RCJC-04,2022-RCLH-01）; 普陀杏林优青培养计划（ptxlyq2301）