驱动蛋白家族成员15(KIF15)对肝细胞癌增殖能力的影响及其作用机制

摘要

目的 探究驱动蛋白家族成员15(KIF15)对肝细胞癌（HCC）增殖能力的影响及其作用机制。方法 通过分析TCGA和GEPIA数据集确定KIF15在HCC中的表达情况以及对肿瘤分期、生存的影响。采用qRT-PCR和Western Blot检测体外培养的人源HCC细胞系（HepG2、Hep3B、MHCC-97H和LM3）与人正常肝细胞系L02细胞的KIF15表达水平，并选择Hep3B和HepG2进行后续研究。通过对Hep3B慢病毒转染sh-NC/sh-KIF15和对HepG2慢病毒转染LV-vector/LV-KIF15进行CCK-8、平板克隆和EdU染色实验评估细胞的活力和增殖能力。GSEA分析KIF15与HCC相关的作用信号通路并通过Western Blot进行检测。计量资料两组间比较采用成组t检验；多组间比较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用LSD-t检验。结果 TCGA和GEPIA数据集分析结果显示KIF15在HCC患者癌组织中的表达明显高于正常组织，并且KIF15与HCC分期成正比，KIF15高表达的HCC患者的生存更差。与sh-NC-Hep3B相比，sh3-Hep3B的KIF15 mRNA水平和蛋白水平均下降（P值均<0.05）；与sh-NC-Hep3B相比，sh3-Hep3B的细胞活力、克隆形成数和EdU阳性率均显著降低（P值均<0.05）。与vectorHepG2相比，LV-KIF15-HepG2的KIF15 mRNA水平和蛋白水平均升高（P值均<0.05）；与vector-HepG2相比，LV-KIF15-HepG2的细胞活力、克隆形成数和EdU阳性率均提高（P值均<0.05）。皮下瘤实验结果显示：与sh-NC-Hep3B相比，sh3-Hep3B的瘤体积和瘤重量降低；Ki67的组化评分降低，而TUNEL的组化评分提高（P值均<0.05）。GSEA分析显示在HCC中PI3K/AKT/mTOR通路与KIF15呈正相关（NES=1.59,P<0.001）,Western Blot检测发现LY294002能够抑制LV-KIF15-HepG2中上调的PI3K/AKT/mTOR通路，与LV-KIF15-HepG2相比，LY294002+LV-KIF15-HepG2的细胞活力、克隆形成数和EdU阳性率降低（P值均<0.05）。结论 KIF15通过上调PI3K/AKT/mTOR信号通路增强HCC的活力和增殖能力。

关键词

癌,肝细胞 / 驱动蛋白 / 信号传导 / 细胞增殖

基金资助

国家自然科学基金（81972888）