铁皮石斛叶发酵液对酒精性肝炎小鼠模型的影响及其作用机制

摘要

目的 探讨铁皮石斛叶发酵液对小鼠酒精性肝炎的干预机制。方法 将70只健康雄性6～8周C57BL/6J小鼠随机分为正常组，模型组，液体饲料对照组，水飞蓟宾组，铁皮石斛叶发酵液低剂量组、中剂量组及高剂量组，共7组，每组各10只。正常组小鼠喂养普通饲料，其他各组小鼠采用Lieber-DeCarli经典法液体饲料饲养8周，诱导小鼠酒精性肝炎模型。造模期间，铁皮石斛叶发酵液低、中、高剂量组小鼠饮用威门石斛水，其余各组小鼠饮用纯净水；正常组、模型组、液体饲料对照组每日给予生理盐水灌胃，水飞蓟宾组给予水飞蓟宾0.25 mL/10 g，铁皮石斛叶发酵液低、中、高剂量组分别给予0.125 mL/10 g、0.250 mL/10 g、0.375 mL/10 g铁皮石斛叶发酵液灌胃，1次/d。第8周水合氯醛腹腔注射麻醉，眼球取血，分离血清采用生化方法检测AST、ALT水平；HE染色和油红O染色观察小鼠肝组织病理学以及脂质积累情况。Luminex多因子检测小鼠血清IL-6、IL-1β、TNF-α及CCL2水平；实时荧光定量PCR、Western Blot、免疫荧光方法检测小鼠肝组织中NLRP3、Caspase-1、Caspase-11、GSDMD、GSDMD-N端、IL-18和IL-1β的蛋白表达。计量资料多组间比较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用LSD-t检验。结果 与正常组比较，模型组小鼠血清AST、ALT、IL-6、IL-1β、TNF-α和CCL2水平均显著升高（P值均<0.05）。与模型组相比，铁皮石斛叶发酵液高剂量组小鼠血清AST、ALT、IL-6、IL-1β、TNF-α和CCL2均明显降低（P值均<0.05）。HE染色结果显示，模型组小鼠肝小叶结构紊乱，有大量的脂肪变性空泡及细胞坏死；与模型组比较，铁皮石斛叶发酵液高剂量组小鼠肝组织病理损伤减轻，大部分肝小叶结构完整，仅少量炎性细胞浸润。油红O染色结果显示，模型组小鼠肝脏出现大脂滴和小脂滴积聚，肝脂肪含量显著增加；与模型组比较，铁皮石斛叶发酵液高剂量组小鼠肝组织脂肪变性明显减轻，多以小脂滴散在存在。肝组织免疫荧光结果显示，模型组小鼠肝细胞胞质中GSDMD阳性染色面积比较正常组显著增加（P<0.001）；铁皮石斛叶发酵液高剂量组小鼠肝细胞胞质中GSDMD阳性染色面积比与模型组比较显著下降（P<0.001）。实时荧光定量PCR和Western Blot检测结果显示，与正常组比较，模型组小鼠肝组织中NLRP3、Caspase-1、Caspase-11、GSDMD、GSDMD-N端、IL-18和IL-1β蛋白表达水平显著增加（P值均<0.05）；与模型组相比，铁皮石斛叶发酵液高剂量组NLRP3、Caspase-1、Caspase-11、GSDMD、GSDMD-N端、IL-18和IL-1β蛋白表达水平明显降低（P值均<0.05）。与模型组相比，铁皮石斛叶发酵液高剂量组Caspase-1和Caspase-11蛋白表达水平均明显降低（P值均<0.05），其中Caspase-1蛋白相对表达量为1.757，较模型组下降26.6%,Caspase-11蛋白相对表达量为0.455，较模型组下降70.3%;Caspase-11较Caspase-1下降幅度更大。结论 铁皮石斛叶发酵液可减轻小鼠酒精性肝炎，其机制可能与抑制Caspase-11介导的非经典细胞焦亡通路有关。

关键词

肝炎,酒精性 / 铁皮石斛 / 细胞焦亡 / 小鼠,近交C57BL