清解化攻方调控NLRP3/TLR4/NF-κB信号通路对重症急性胰腺炎小鼠模型胰腺组织的保护作用

摘要

目的 观察清解化攻方对重症急性胰腺炎（SAP）小鼠模型的治疗作用，探索清解化攻方抗炎症反应的作用机制。方法 将36只C57BL/6J雄性小鼠随机分成空白组，模型组，清解化攻方低、中、高剂量组，西药组（乌司他丁），每组6只，除空白组小鼠，余各组小鼠采用逆行胰胆管注射5%牛黄胆酸钠建立SAP模型，清解化攻方低、中、高剂量组在造模后分别予以清解化攻方1、2、4 g/kg灌胃，西药组在造模后予以腹腔注射乌司他丁（5×104 U/kg），共干预7 d。采用苏木素-伊红染色观察胰腺组织病理改变；酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测小鼠α-淀粉酶、脂肪酶、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-18和TNF-α水平；RTqPCR检测胰腺组织NOD样受体蛋白3(NLRP3)、Toll样受体4(TLR4)、核因子-κB(NF-κB)mRNA表达水平；免疫组化检测胰腺组织NLRP3、TLR4、NF-κB的阳性表达率；Western Blot技术检测NLRP3、TLR4、NF-κB、IL-1β、IL-6蛋白的表达水平。计量资料多组间比较采用方差分析，进一步两两比较采用LSD-t检验。结果 与空白组相比，模型组小鼠胰腺组织结构弥漫性破坏、胰腺小叶间隔局灶性扩张、腺泡萎缩和大量炎症细胞浸润，α-淀粉酶、脂肪酶、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-18和TNF-α含量明显升高（P值均<0.05）,NLRP3、TLR4、NF-κB mRNA表达水平及阳性表达率均明显上升（P值均<0.05）,NLRP3、TLR4、NF-κB、IL-1β、IL-6蛋白表达均明显上调（P值均<0.05）。与模型组相比，清解化攻方各剂量组和西药组可见小鼠胰腺组织结构稍紧密、完整，胰腺腺泡细胞排列有序，伴少量炎症细胞浸润和胰腺小叶出血灶，α-淀粉酶、脂肪酶、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-18和TNF-α含量明显下降（P值均<0.05）,NLRP3、TLR4、NF-κB mRNA表达水平及阳性表达率均明显降低（P值均<0.05）,NLRP3、TLR4、NF-κB、IL-1β、IL-6蛋白表达水平均明显减弱（P值均<0.05）。结论 清解化攻方可能通过抑制NLRP3/TLR4/NF-κB信号通路相关蛋白的激活，减少炎症介质的释放，防止炎症级联反应增强，进而对SAP小鼠胰腺组织发挥保护作用。

关键词

胰腺炎 / NLR蛋白质类 / Toll样受体4 / NF-κB / 清解化攻方 / 小鼠,近交C57BL

基金资助

国家自然科学基金（82160890）; 广西自然科学基金面上项目（2020GXNSFAA297062）; 广西医疗卫生适宜技术开发与推广应用项目（S2019021）; 广西中医药大学研究生教育创新计划项目（YCSW2023383）