骨髓巨噬细胞M2亚型共培养后的骨髓间充质干细胞移植治疗肝硬化大鼠模型的效果分析

摘要

目的 探讨骨髓巨噬细胞M2亚型（M2-BMDM）共培养后的骨髓间充质干细胞（BMSC~(M2)）移植对四氯化碳/2-乙酰氨基芴（CCl_4/2-AAF）诱导肝硬化大鼠模型进展的影响。方法 分离大鼠BMDM并极化为M2表型；分离大鼠BMSC，培养至第3代时与M2-BMDM共培养后获取BMSC~(M2)。CCl_4皮下注射6周建立大鼠肝硬化模型。将模型大鼠随机分为模型组（M组）、BMSC组、BMSC~(M2)组，同时设有正常组（N组），每组6只。第7周开始，模型大鼠于CCl_4皮下注射的同时予以2-AAF灌胃，分组干预，10周末取材，观察肝功能、肝组织病理、肝组织羟脯氨酸（Hyp）含量，以及肝星状细胞、肝祖细胞、胆管细胞、肝细胞标志物的变化情况。计量资料多组间比较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用LSD-t检验。结果 与N组比较，M组大鼠血清ALT、AST活性均显著升高（P值均<0.01）；与M组比较，BMSC组和BMSC~(M2)组大鼠ALT、AST均显著降低（P值均<0.01），且BMSC~(M2)组显著优于BMSC组（P值均<0.05）。与N组比较，M组大鼠肝脏Hyp含量、α-SMA mRNA及蛋白表达均显著升高（P值均<0.01）；与M组比较，BMSC组和BMSC~(M2)组Hyp含量、α-SMA表达均显著降低（P值均<0.05），且BMSC~(M2)组α-SMA水平显著低于BMSC组（P<0.01）。与N组比较，M组大鼠肝祖细胞标志物EpCam、Sox9以及胆管细胞标志物CK7、CK19 mRNA表达均显著增加（P值均<0.01），肝细胞标志物HNF-4α和Alb表达均显著降低（P值均<0.01）；与M组比较，BMSC组和BMSC~(M2)组EpCam、Sox9、CK7和CK19 mRNA表达均显著降低（P值均<0.05）,HNF-4α和Alb mRNA表达均显著增加（P值均<0.05）；且与BMSC组比较，BMSC~(M2)组EpCam和CK19 mRNA表达均显著降低（P值均<0.05），而HNF-4αmRNA表达显著增加（P<0.05）。结论 M2-BMDM可提高BMSC对CCl_4/2-AAF诱导大鼠肝硬化的治疗效应，为进一步提高BMSC治疗肝硬化的作用提供了新思路。

关键词

肝硬化 / 间质干细胞 / 巨噬细胞 / 大鼠,Wistar

基金资助

国家自然科学基金面上项目（81874390）; 上海市科委自然科学基金面上项目（21ZR1464100）; 上海市科委2022年度“科技创新行动计划”生物医药科技支撑专项（22S11901700）; 上海市临床重点专科建设项目（shslczdzk01201）