内质网应激蛋白激酶RNA样ER激酶（PERK）通路对肝星状细胞激活及Ⅰ型胶原蛋白表达的影响

摘要

目的 探讨内质网应激蛋白激酶RNA样ER激酶（PERK）/真核生物翻译起始因子2α(eIF2α)信号通路对肝星状细胞（HSC）活化的影响。方法 收集11例肝穿刺病理提示S1～S4肝纤维化患者和9例肝血管瘤、肝腺瘤患者术后周围正常肝组织病理切片，进一步行组织免疫组化检测PERK、eIF2α、C/EBP环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白（CHOP）表达情况；使用不同浓度的内质网应激诱导剂毒胡萝卜素（0、125、250、500、1 000 nmol/L）作用于人HSC-LX2，使用qRT-PCR检测PERK mRNA及Western Blot检测PERK、肌醇需要酶1(IRE1)、激活转录因子6(ATF6)、CHOP及α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达水平。使用慢病毒转染构建PERK稳定过表达LX-2组及对照组，并通过qRT-PCR检测PERK、eIF2α、α-SMA mRNA,Western Blot检测PERK、p-eIF2α、α-SMA蛋白表达，免疫荧光检测胶Ⅰ型原蛋白（COL1A1）表达。符合正态分布的计量资料两组间比较采用成组t检验，多组间比较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用LSD-t检验；不符合正态分布的计数资料，两组间比较采用Mann-Whitney U秩和检验。结果 与正常肝组织相比，肝纤维化患者肝组织中PERK、eIF2α及CHOP表达升高，差异均有统计学意义（Z=-3.56、t=-5.75、Z=-3.52,P值均<0.001）。不同浓度毒胡萝卜素作用后，与溶媒组相比，内质网相关蛋白PERK、CHOP、IRE1、ATF6及α-SMA蛋白表达显著升高（P值均<0.05）。与对照空载慢病毒组相比，PERK稳定过表达组PERK mRNA、eIF2α mRNA、α-SMA mRNA表达及PERK、p-eIF2α、α-SMA蛋白表达明显升高（P值均<0.05）。细胞免疫荧光结果提示，PERK过表达组COL1A1表达升高（P<0.05）。结论 PERK过表达可诱导LX-2细胞α-SMA、胶原蛋白COL1A1表达，提示PERK信号通路可能是HSC活化的重要机制之一。

关键词

内质网应激 / 真核细胞起始因子2 / 肝星状细胞 / 胶原Ⅰ型

基金资助

广西自然科学基金（2023GXNSFBA026056）; 广西壮族自治区人民医院青年基金（QN2020-1）