Go-ichi-ni-san复合物亚基1(GINS1)对肝细胞癌进展和化疗耐药的影响

摘要

目的 探究Go-ichi-ni-san复合物亚基1(GINS1)在肝细胞癌（HCC）进展和化疗耐药中的作用及相关机制。方法 通过肿瘤数据库GEPIA2网站检索并分析GINS1在HCC患者和健康人群中的表达差异。收集2017年5月—2021年1月新疆医科大学附属肿瘤医院及第一附属医院收治的40例HCC患者病理组织，通过免疫组化染色检测GINS1在HCC组织和对应癌旁组织中的表达差异，分析GINS1表达水平与HCC临床TNM分期之间的关系。Western Blot检测GINS1在HCC细胞系Huh7、Hep3B、Li-7、MHCC97H和人正常肝细胞系QSG7701中的表达差异。通过慢病毒转染细胞的方法构建稳定敲低GINS1的MHCC97H细胞株及其阴性对照细胞株。通过CCK-8实验和克隆形成实验检测细胞增殖能力，划痕实验检测细胞迁移能力，Transwell实验检测细胞侵袭能力，使用奥沙利铂处理细胞以检测细胞对化疗药物的敏感性。构建裸鼠负瘤模型，观察GINS1敲低对HCC体内生长的影响。Western Blot检测各组细胞Notch通路和JAK/STAT通路蛋白表达水平。加入Notch受体激动剂Jagged-1处理细胞，分析GINS1与Notch/JAK/STAT通路之间的关系。计量资料两组间比较采用成组t检验，多组间比较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用LSD-t检验。结果 GINS1在HCC患者、HCC组织和HCC细胞系中均表达上调（P值均<0.05）。GINS1表达水平与HCC临床TNM分期正相关（r=0.822,P=0.011）。与阴性对照组细胞相比，敲低GINS1的MHCC97H细胞增殖、迁移和侵袭活性均降低（P值均<0.01），对奥沙利铂敏感性增强（P<0.01）。与对照组裸鼠相比，GINS1敲低导致裸鼠形成的肿瘤质量和体积均受到显著抑制（P值均<0.001）。与阴性对照组细胞相比，在敲低GINS1的MHCC97H细胞内，Notch1、Notch3、p-JAK2和p-STAT3表达水平明显降低（P值均<0.05）,JAK2和STAT3总体表达水平无明显差异（P值均>0.05）。Jagged-1处理后，敲低GINS1的MHCC97H细胞的增殖、迁移和侵袭活性均有所增加，而细胞对奥沙利铂敏感性有所减弱，p-JAK2、p-STAT3水平升高（P值均<0.05）。结论 GINS1在HCC中表达上调，并且能够通过Notch/JAK2/STAT3通路促进HCC进展和肿瘤细胞化疗耐药。

关键词

GINS复合物 / 癌,肝细胞 / 抗药性,肿瘤 / 信号传导

基金资助

新疆维吾尔自治区自然科学基金（2022D01C245）; 新疆维吾尔自治区产学合作协同育人项目（MRHT1000023042108）