非酒精性脂肪性肝炎小鼠模型肝组织T淋巴细胞的特征分析

摘要

目的 采用单细胞测序技术揭示非酒精性脂肪肝炎（NASH）小鼠肝组织T淋巴细胞单细胞水平的异质性和转录组学特征，为研究T淋巴细胞在NASH中的作用机制提供新的依据。方法 6只C57BL/6雄性小鼠随机分为普通饲料喂养的对照组和胆碱蛋氨酸缺乏饲料喂养的NASH组，每组各3只。造模6周后取小鼠肝组织进行单细胞RNA测序。分析T淋巴细胞单细胞亚群的特异性差异表达基因，分别行降维聚类、细胞类型注释、t分布随机邻域嵌入（t-SNE）、小提琴图、基因本体（GO）功能富集分析和京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析。利用免疫荧光染色观察两组小鼠肝脏中Tcrα(T淋巴细胞分子标志)、Tcf7、Cxcr6（特征标志基因）的表达情况。计量资料两组间比较采用成组t检验。结果 小鼠肝脏中共鉴定出2个T淋巴细胞亚群：（1）第6簇T淋巴细胞占比从对照组的58.5%降低到NASH组的48.7%。前4位特异性基因包括Nsg2、Cd8b1、Cd8a和Tcf7。该簇65%的细胞表达Tcf7（第6簇特征标志基因），定义为Tcf7+T淋巴细胞亚群。GO和KEGG富集分析显示，它们参与调控T淋巴细胞活化、白细胞黏附、结合泛素样蛋白连接酶，以及辅助性T淋巴细胞（Th）17、Th1、Th2细胞分化等信号通路。（2）第7簇T淋巴细胞占比从对照组的41.5%增高到NASH组的51.3%。前4位特异性基因包括Cd40lg、Tcrg-C1、Il2rα和Cxcr6。该簇90%的细胞表达Cxcr6，定义为Cxcr6+T淋巴细胞亚群。GO和KEGG富集分析提示，该亚群参与调控T淋巴细胞活化、细胞因子产生，以及T淋巴细胞受体信号通路、Th17细胞分化与MAPK信号通路。免疫荧光结果显示，与对照组相比，NASH组小鼠肝脏中Tcf7蛋白和Tcrα蛋白共染阳性区域减少（1.80%±0.67%vs 0.33%±0.13%, P<0.05），而Cxcr6蛋白和Tcrα蛋白共染阳性区域增加（0.50%±0.09%vs 2.66%±0.33%, P<0.001）。结论 NASH小鼠肝脏中Tcf7+T淋巴细胞的占比降低，而Cxcr6+T淋巴细胞的占比增高，揭示了NASH小鼠肝组织T淋巴细胞的特征和差异。

关键词

非酒精性脂肪性肝炎 / T淋巴细胞 / 单细胞测序 / 小鼠,近交C57BL

基金资助

上海市浦东新区卫生健康委员会医学学科建设项目（PWYgf2021-02）