基于腺苷酸活化蛋白激酶/Unc-51样自噬激活激酶1信号通路探讨高原低氧适应对肝缺血再灌注损伤大鼠模型的保护作用

摘要

目的 观察高原低氧适应对肝缺血再灌注损伤（HIRI）大鼠模型的保护作用，探索高原低氧适应激活自噬的作用机制。方法 将56只SD雄性大鼠随机分为以下7组：平原假手术组（P-S）、平原模型组（P-M）、急性高原低氧假手术组（AHH-S）、急性高原低氧模型组（AHH-M）、高原低氧适应假手术组（HHA-S）、高原低氧适应模型组（HHA-M），以及含AMPK抑制剂复合物C(CC)的高原低氧适应模型组（HHA-M-CC），每组8只。急性高原低氧组和高原低氧适应组分别将大鼠置于海拔5 000米的低压氧舱中1周和12周；假手术组仅开腹暴露肝门静脉，未做血管夹闭处理；HHA-M-CC组术前1 h行腹腔注射20 mg/kg剂量CC，其余组注射等体积生理盐水。采用全自动生化分析仪检测肝功能指标ALT、AST、TBil水平；苏木素-伊红染色观察肝组织病理改变；透射电镜观察肝组织自噬体形成情况；RT-q PCR检测肝脏腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）、Unc-51样自噬激活激酶1(ULK1)mRNA表达水平；Western Blot技术检测磷酸化腺苷酸蛋白激酶（p-AMPK）、磷酸化UNC-51样激酶（p-ULK1）、Beclin-1、微管相关蛋白1轻链3Ⅱ型（LC3Ⅱ）蛋白的表达水平。计量资料多组间比较采用方差分析，进一步两两比较采用LSD-t检验。结果 与AHH-M组和HHA-M-CC组比较，HHA-M组ALT、AST、TBil水平明显降低（P值均<0.05），肝组织病理损伤减弱，Suzuki评分显著降低（P值均<0.05），透射电镜下肝细胞形态结构异常程度减弱，自噬体数量明显增多，AMPK、ULK1 mRNA表达水平均明显上升（P值均<0.05）,p-AMPK、p-ULK1、Beclin-1、LC3Ⅱ蛋白表达明显上调（P值均<0.05）。结论 高原低氧适应可通过AMPK/ULK1信号通路相关蛋白的激活，增强肝细胞的自噬作用，进而缓解SD大鼠HIRI。

关键词

低氧 / 再灌注损伤 / 自噬 / 大鼠, Sprague-Dawley