三结构域蛋白29(TRIM29)与HBV复制及聚乙二醇干扰素α-2b抗病毒作用的关联性分析

摘要

目的 三结构域蛋白29（TRIM29）参与多种疾病的发生和发展，与部分DNA和RNA病毒复制密切相关，本研究对TRIM29与HBV复制及聚乙二醇干扰素（PEG-IFN）α-2b抗病毒作用之间的关系展开初步讨论。方法 选取2021年10月—2022年6月在贵州医科大学附属医院感染内科门诊就诊的CHB患者64例，其中未治疗患者34例（CHB组），经PEG-IFN-α-2b治疗患者30例，体检中心30例健康志愿者作为对照（健康对照组）。收集志愿者年龄、性别、ALT、AST、TBil、DBil、HBV DNA和外周血单个核细胞（PBMC）。采用Hep G2和Hep G2.2. 15细胞作为细胞模型，将TRIM29特异性过表达质粒或si RNA和对照转染至细胞；PEG-IFN-α-2b（0、10、100、1 000和10 000 U/mL）处理Hep G2细胞和Huh7细胞；TRIM29特异性si-RNA或阴性对照联合PEG-IFN-α-2b处理Hep G2.2. 15细胞。ELISA检测HBs Ag和HBe Ag的浓度，q RT-PCR检测TRIM29和HBV RNA相对表达水平，Western Blot检测STING、p-TBK1、TBK1、p IRF3、IRF3、MX1和IFIT1蛋白表达情况，免疫共沉淀检测TRIM29与STING蛋白相互作用关系。正态分布的计量资料两组间比较采用成组t检验，多组间比较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用LSD-t检验。计数资料两组间比较采用χ²检验或Fisher检验。结果 CHB组患者外周血TRIM29表达明显高于健康对照组（P<0.001）。在细胞实验中，HBs Ag、HBe Ag和HBV RNA的表达均随TRIM29表达上调而升高，随TRIM29表达下调而降低（P值均<0.05）。TRIM29与STING互相结合，并通过蛋白酶降解STING，与对照组相比，过表达TRIM29对TBK1和IRF3总蛋白无明显变化，STING、p-TBK1和p-IRF3蛋白表达水平均降低（P值均<0.05）。处理Hep G2细胞和Huh7细胞的PEG-IFN-α-2b浓度越高，TRIM29蛋白和m RNA的表达水平越低（P值均<0.01）。CHB患者在PEG-IFN-α-2b治疗期间，TRIM29 mRNA表达水平逐渐降低，且早期应答组和无应答组间差异均有统计学意义（P值均<0.05）。在等量PEG-IFN-α-2b处理下，与对照相比，敲低TRIM29后Hep G2.2. 15细胞的MX1和IFIT1蛋白表达水平明显增高（P值均<0.05）。在PEG-IFN-α-2b治疗早期，CHB患者PBMC中TRIM29表达逐渐降低。结论 TRIM29靶向并降解STING，通过抑制STING-TBK1-IRF3信号通路促进HBV复制。TRIM29干扰PEG-IFN-α-2b的抗病毒作用，CHB患者PBMC中TRIM29的表达水平可能作为预测患者对PEG-IFN-α-2b治疗应答的指标。

关键词

乙型肝炎病毒 / 三结构域蛋白29 / 聚乙二醇干扰素α / 信号通路

基金资助

国家自然科学基金地区基金（82060114）; 贵州省卫健委2023年度科技基金项目（gzwkj2023-042）; 贵州省卫生健康委员会2024年科技基金项目（gzwkj2024-010）