下瘀血汤对非酒精性脂肪性肝病小鼠模型肾损伤的干预作用及其机制

摘要

目的 探讨高脂饮食（HFD）诱导非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）对小鼠肾脏的影响，以及下瘀血汤对NAFLD小鼠模型的保护作用及其机制。方法 选取2020年9月—2021年9月在上海中医药大学附属普陀医院健康对照及NAFLD患者各25例，检测总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）及尿酸（UA）水平；将24只雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组（LFD组）、高脂组（HFD组）及高脂+下瘀血汤组（XYXD组），每组8只，第13周开始给予下瘀血汤每日1次灌胃至18周末，维持6周。检测各组TC、TG、BUN及Cr水平。HE、油红O染色观察肝脏和肾脏病理变化，免疫组化双染技术检测CD68和α-SMA表达。实时荧光定量PCR检测肾组织固醇调节元件结合蛋白1(SREBP1)、脂肪酸合酶（FASN）、IL-6、TNF-α、结蛋白（Desmin）和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的mRNA表达。Western Blot检测SREBP1和TNF-α蛋白水平。计量资料多组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用LSD-t检验；两组间比较采用成组t检验。结果 与健康对照组患者相比，NAFLD患者TC、TG、BUN、Cr、UA水平均升高（P值均<0.05）。与LFD组小鼠相比，HFD组小鼠体质量、TC、TG、BUN、Cr水平均升高（P值均<0.001）；与HFD组相比，XYXD显著抑制NAFLD小鼠TC、TG、BUN、CR表达（P值均<0.001）。肝脏病理学显示：HFD组小鼠肝脂肪变及炎症浸润较LFD组显著增加，而XYXD组病变显著减轻。肾脏病理学显示：与LFD组相比，HFD组肾组织炎性浸润明显，脂肪变显著，肾脏胶原形成明显；与HFD组相比，XYXD显著减轻炎症浸润、抑制脂肪变及肾脏胶原形成。实时荧光定量PCR结果显示：与LFD组相比，HFD组肾组织中SREBP1、FASN、IL-6、TNF-α、Desmin和α-SMA的m RNA相对表达水平均显著升高（P值均<0.001）,XYXD组较HFD组均显著降低（P值均<0.001）。Western Blot结果显示：与LFD组比较，HFD组SREBP1及TNF-α蛋白表达水平均明显上调（P值均<0.05）；与HFD组比较，XYXD组SREBP1及TNF-α蛋白表达水平均明显下调（P值均<0.05）。免疫组化染色结果显示：HFD组α-SMA和CD68阳性染色及双阳性染色较LFD组均显著升高（P值均<0.05）,XYXD组较HFD组均显著下降（P值均<0.05）。结论 HFD可诱导肾脏脂肪变、炎症浸润及胶原形成，下瘀血汤可能通过抑制肾组织巨噬细胞与肌成纤维细胞表达发挥肾脏保护作用。

关键词

非酒精性脂肪性肝病 / 膳食,高脂 / 肾损伤 / 下瘀血汤 / 小鼠,近交C57BL

基金资助

国家自然科学基金（82004106）; 上海市自然基金（20ZR1450300）; 上海市普陀区自主创新项目（ptkwws202223）; 上海市中医药高层次人才引领计划（ZY[2021-2023]-0403）; 上海市普陀区杏林优青培养计划（ptxlyq2301）