芪术方对高脂高果糖高胆固醇诱导的非酒精性脂肪性肝病小鼠模型的影响及其机制

摘要

目的 探讨芪术方对非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）小鼠模型的疗效及作用机制。方法 60只雄性C57BL/6J小鼠随机分为正常组，模型组，芪术方低（4.75 g/kg）、中（9.50 g/kg）、高剂量组（19.00 g/kg），多唏磷脂酰胆碱组（磷脂组）（228 mg/kg），每组10只。高脂高胆固醇饲料和20%果糖水造模16周后，各组给予相应药物干预，每天给药1次，连续8周。检测血清ALT、AST、TC、TG、LDL；酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清游离脂肪酸（FFA）、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）；苏木素-伊红（HE）和油红O染色观察肝组织病理变化；蛋白免疫印迹法（Western Blot）检测微管相关蛋白轻链3B(LC3BⅡ/Ⅰ)、螯合体（p62/SQSTM1）、Beclin-1、动力相关蛋白1(Drp1)表达。实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测Drp1、Beclin-1、p62/SQSTM1 mRNA表达水平。计量资料多组间比较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用LSD-t检验。结果 与正常组比较，模型组血清TG、TC、ALT、AST、LDL、FFA、TNF-α、IL-1β、MDA水平均升高，SOD水平降低（P值均<0.05）。HE染色结果显示，模型组小鼠肝组织可见肝细胞脂肪变及大量脂肪空泡；油红O染色结果显示，模型组小鼠肝细胞内有大量大小不一红色脂滴沉积，油红O染色面积百分比较正常组升高（P<0.05）。Real-time PCR结果显示，与正常组比较，模型组肝组织中Drp1、Beclin-1 mRNA升高，p62/SQSTM1 mRNA降低（P值均<0.05）。Western Blot结果显示，与正常组比较，模型组肝组织中Drp1、Beclin-1、LC3BⅡ/Ⅰ蛋白表达水平升高，p62/SQSTM1蛋白表达水平降低（P值均<0.05）。与模型组比较，部分剂量芪术方组和磷脂组血清TG、TC、ALT、AST、LDL、FFA、TNF-α、IL-1β、MDA水平均降低，SOD水平升高（P值均<0.05）。与模型组比较，各用药组肝组织脂肪变改善明显，且油红O染色面积百分比降低（P值均<0.05）;Drp1、Beclin-1 mRNA降低，p62/SQSTM1 mRNA升高（P值均<0.05）;Drp1、Beclin-1、LC3BⅡ/Ⅰ蛋白表达水平降低，部分用药组p62/SQSTM1蛋白表达水平升高（P值均<0.05），且芪术方中、高剂量效果更明显（P值均<0.01）。结论 芪术方改善NAFLD小鼠肝脂质代谢及炎症水平可能与调控肝细胞线粒体自噬有关。

关键词

非酒精性脂肪性肝病 / 芪术方 / 线粒体自噬 / 脂质代谢 / 炎症

基金资助

上海市2021年度“科技创新行动计划”生物医药科技支撑专项（21S1900400）; 安徽省自然科学基金（2308085MH293）; 安徽省高校科学研究重大项目（2023AH040098）; 安徽省卫生健康科研重点项目（AHWJ2023A10035）; 国家中医药管理局高水平中医药重点学科建设项目（中医肝胆病学）（zyyzdxk-2023060）