白细胞介素22对肝星状细胞活化的影响及其机制

摘要

目的探讨肝星状细胞活化过程中白细胞介素（IL)22发挥的作用及影响机制。方法选取人肝星状细胞系LX-2细胞为研究对象，以转化生长因子（TGF)β1诱导LX-2细胞构建肝星状细胞活化模型，以梯度浓度的IL-22处理LX-2细胞，通过Western Blot、q RT-PCR检测活化标志物Ⅰ型胶原蛋白（COL1A1）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达水平以确定适宜的药物工作浓度、时间；通过Western Blot、q RT-PCR及免疫荧光方法检测经IL-22处理的活化肝星状细胞中成纤维细胞因子诱导早期反应蛋白14(Fn14）、内质网应激（ERS）及其活化标志物水平；以衣霉素（TM）诱导LX-2细胞ERS，通过Western Blot、q RT-PCR检测经IL-22处理后LX-2细胞ERS及其活化标志物水平；使用肿瘤坏死因子样细胞凋亡弱诱导剂（TWEAK）、小干扰RNA分别上/下调Fn14，再检测磷酸化肌醇需求蛋白1α(p-IRE1α）、肌醇需求蛋白1α(IRE1α）、转录因子剪接型X-盒结合蛋白1(XBP1s）、COL1A1和α-SMA基因及蛋白水平；在IL-22处理TGF-β1诱导的LX-2细胞的基础上加用TWEAK上调Fn14，通过Western Blot、免疫荧光方法检测Fn14、ERS及其活化标志物水平。计量资料两组间比较采用成组t检验；多组间比较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用Sidak’s多重比较检验。结果与TGF-β1组相比，TGFβ1+IL-22组COL1A1、α-SMA的蛋白和m RNA表达水平均下降，且在IL-22浓度为10 ng/m L以上作用24小时时效果更加显著（P值均<0.01）；与TGF-β1组相比，TGF-β1+IL-22组Fn14、p-IRE1α、XBP1s表达水平均下降（P值均<0.05）；与TM组相比，TM+IL-22组p-IRE1α、XBP1s、COL1A1和α-SMA表达水平均下降（P值均<0.05）；与沉默对照（NC）组相比，Fn14 si RNA组p-IRE1α、XBP1s、COL1A1和α-SMA表达水平均下降（P值均<0.05）；与正常对照组相比，TWEAK组Fn14、p-IRE1α、XBP1s、COL1A1和α-SMA表达水平均上升（P值均<0.01）；与TGF-β1+IL-22组相比，TGF-β1+IL-22+TWEAK组Fn14、p-IRE1α、XBP1s、COL1A1和α-SMA表达水平均上升（P值均<0.05）。结论IL-22通过抑制Fn14负调控肝星状细胞ERS进而抑制其活化增殖。

关键词

肝纤维化 / 白细胞介素22 / 肝星状细胞 / 内质网应激

基金资助

国家自然科学基金（81900552）; 南京市卫生科技发展专项资金项目-杰出青年基金项目（JQX20005）