叶酸对邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯（DEHP）暴露导致小鼠胆汁淤积型肝损伤的保护作用

摘要

目的 探讨叶酸对邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯（DEHP）暴露诱发小鼠胆汁淤积型肝损伤的保护作用及其机制。方法 将ICR小鼠随机分为对照（Control）组、叶酸高剂量（H-FA）组、DEHP组、DEHP+叶酸低剂量（DEHP+L-FA）组、DEHP+叶酸高剂量（DEHP+H-FA）组，每组6只。H-FA组、DEHP+L-FA组和DEHP+H-FA组给予相应剂量的叶酸灌胃，Control组和DEHP组灌胃等量的PBS溶液。2 h后，DEHP组、DEHP+L-FA组和DEHP+H-FA组给予含200 mg/kg DEHP的玉米油，Control组和H-FA组灌胃等量的纯玉米油，共灌胃4周。记录小鼠每天的体质量和摄食量，收集血液和肝组织。生化仪检测血清总胆汁酸（TBA）和碱性磷酸酶（ALP）水平；HE染色观察肝组织病理变化；试剂盒检测肝组织丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）含量；LC-MS/MS检测小鼠血清胆汁酸谱；Western Blot法检测肝脏胆汁酸代谢相关蛋白的表达水平。计量资料多组间比较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用LSD-t检验。结果 与对照组相比，DEHP组小鼠每日摄食量明显下降，体质量从第10天开始显著降低（P值均<0.05）；与DEHP组相比，DEHP+L-FA组与DEHP+H-FA组小鼠的体质量和摄食量基本不变（P值均>0.05）。与对照组相比，DEHP组小鼠肝质量指数、血清TBA及ALP均显著升高（P值均<0.05），肝组织可见汇管区扩大，胆管变形增生及少量炎性细胞浸润；与DEHP组相比，DEHP+L-FA组与DEHP+H-FA组小鼠肝质量指数均明显下降（P值均<0.01）,DEHP+H-FA组的血清TBA和ALP均显著下降（P值均<0.05），叶酸干预后小鼠肝组织形态结构明显改善。与对照组相比，DEHP组小鼠肝脏SOD含量明显下降（P<0.05），肝脏MDA含量明显增加（P<0.01）；与DEHP组相比，MDA和SOD含量在DEHP+H-FA组均显著回调（P值均<0.05）。与对照组相比，DEHP组小鼠血清中α-鼠胆酸（α-MCA）、β-鼠胆酸（β-MCA）、去氧胆酸（DCA）、石胆酸（LCA）、牛磺胆酸（TCA）、牛磺去氧胆酸（TDCA）、牛磺熊去氧胆酸（TUDCA）、牛磺-β-鼠胆酸（T-β-MCA）、牛磺-α-鼠胆酸（T-α-MCA）、牛磺猪去氧胆酸（THDCA）、牛磺石胆酸（TLCA）均明显升高（P值均<0.05），熊去氧胆酸（UDCA）明显降低（P<0.05）；与DEHP组相比，血清中DCA、LCA、TCA、TDCA、TUDCA、T-β-MCA、T-α-MCA、THDCA、TLCA在DEHP+H-FA组均明显回调（P值均<0.05）。与对照组相比，DEHP组小鼠肝脏FXR和CYP3A11蛋白表达量均明显增加（P值均<0.01）,CYP7A1和MRP2蛋白表达量显著降低（P值均<0.01）；与DEHP组相比，肝脏FXR和CYP3A11蛋白表达量在DEHP+L-FA组和DEHP+H-FA组中均明显下调（P值均<0.05）;MRP2蛋白表达量在DEHP+L-FA组DEHP+H-FA组中均显著上调（P值均<0.05）;CYP7A1蛋白表达量在DEHP+H-FA组中显著上调（P<0.05）。结论 叶酸对DEHP暴露导致的小鼠胆汁淤积型肝损伤有保护作用，其机制可能是调节胆汁酸合成、代谢与转运从而维持胆汁酸稳态。

关键词

邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯 / 叶酸 / 胆汁淤积 / 胆汁酸类

基金资助

国家自然科学基金（82073566）; 安徽省高校优秀青年人才支持计划资助项目（gxyq2019014）; 安徽省公共卫生临床中心安徽医科大学第一附属医院北区科研培育基金资助项目（2023YKJ14,2023YKJ06,2023YKJ11）