华蟾素调控AKT介导的上皮间质转化抑制肝细胞癌肺转移裸鼠模型的作用机制

摘要

目的 研究华蟾素通过调控肝细胞癌（HCC）上皮间质转化（EMT）抑制HCC转移的作用和机制。方法 将36只6周龄雄性BALB/c裸鼠尾静脉注射MHCC97H细胞建立肝癌肺转移瘤模型，随机分为华蟾素高、低剂量组和对照组。建模当日起分别腹腔注射华蟾素120μL/kg、60μL/kg或生理盐水，每周2次。8周后取肺组织行HE染色检测肝癌肺转移率。MHCC97H细胞用华蟾素高、低剂量（2.5μL/m L、5μL/m L）干预，通过划痕实验、RT-PCR以及Western Blot检测细胞迁移能力和EMT相关分子的表达。用CoCl₂孵育模拟低氧环境诱导MHCC97H细胞，同时加入高、低剂量华蟾素干预，通过划痕实验和Western Blot检测华蟾素对低氧诱导的细胞迁移能力和EMT的影响。使用转录组学分析华蟾素对MHCC97H细胞的效应机制。用Western Blot检验华蟾素干预对MHCC97H细胞的蛋白激酶B（AKT）、磷酸化AKT（P-AKT）表达水平的影响。计量资料多组间比较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用LSD-t检验，两组间比较采用成组t检验。结果 华蟾素干预组裸鼠较对照组肝癌肺转移率下降。与对照组相比，华蟾素干预使MHCC97H细胞划痕愈合率减小、上皮型分子表达上调（t=2.860,P<0.05），并使EMT转录因子和基质型分子下调（t值分别为3.545、2.022、2.852、2.341,P值均<0.05）。低氧诱导上调MHCC97H细胞划痕愈合率和基质型分子、EMT转录因子表达水平（P值均<0.05），华蟾素干预逆转EMT变化并抑制划痕愈合（P值均<0.05）。肝癌细胞转录组学分析显示，华蟾素组与对照组存在显著的基因差异，华蟾素主要影响了肿瘤、代谢、免疫和信号传导相关基因表达，其中AKT信号转导通路中的差异基因数量最多。进一步检测发现华蟾素干预可下调HCC细胞AKT、P-AKT和P-AKT/AKT的水平（t值分别为2.434、3.401、2.258,P值均<0.05）。结论 华蟾素可抑制肝癌转移，尤其对于低氧环境诱导的肝癌转移具有显著抑制作用，调控AKT信号转导通路介导的HCC细胞EMT可能是其部分作用机制。

关键词

癌,肝细胞 / 肿瘤转移 / 华蟾素 / 上皮-间质转化

基金资助

上海市青年科技英才扬帆计划项目（20YF1450000）; 龙华医院科技创新项目（CX202205）; 上海市卫生健康委卫生行业临床研究专项（202040223）