人白介素24融合载体的构建、突变纠正和表达优化

范秋丽; 宋德贵

doi:10.16088/j.issn.1001-6600.2016.01.024

广西师范大学学报（自然科学版） ›› 2016, Vol. 34 ›› Issue (01) : 150 -155. DOI: 10.16088/j.issn.1001-6600.2016.01.024

人白介素24融合载体的构建、突变纠正和表达优化

范秋丽, 宋德贵

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摘要

以武汉大学病毒学国家重点实验室保存的白介素24(IL-24)为模板,构建原核表达载体pET28a-IL-24,转化大肠杆菌DH5α,挑取单克隆,测序结果显示:在IL-24第18位A→G,21位C→T,412位G→A,18位和21位的突变没有使该位上的氨基酸发生改变,而412位的突变导致了该位点上的氨基酸发生改变——由丙氨酸A变为苏氨酸T。通过设计突变引物,二次PCR将其纠正,转化大肠杆菌BL21。通过改变诱导剂IPTG的浓度、诱导时间和诱导温度摸索最佳诱导条件,SDS-PAGE、Western blot检测显示有融合蛋白6hisIL-24表达。结果表明:通过二次PCR成功构建了IL-24原核表达载体,表达产物主要以包涵体的形式存在,最佳诱导温度为28℃,最佳诱导剂浓度为1mmol/L,最佳诱导时间是8h。